Pay:
Negatif boyama vakfı, tekniği, avantajları ve dezavantajları
negatif boyama Bazı mikroorganizmalarda kapsüllerin varlığını vurgulamak için özel bir renklendirme yöntemidir. Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae ve Cryptococcus neoformans-, klinik örneklerden veya saf kültürlerden.
Negatif boyama uygulamak için yaygın olarak kullanılan doğrudan numune beyin omurilik sıvısıdır. Bu teknik, özellikle menenjitin varsayımsal tanısı için hızlı bir alternatiftir. Cryptococcus neoformans.
Aynı şekilde, bu leke genel olarak balgam ve steril sıvıların yanı sıra genç saf kültürlerden elde edilen suşlara da uygulanabilir. Bu teknik yürütülmesi için nigrosin veya Çin mürekkebi kullanır; bu nedenle, kısa sürede büyük teşhis değeri hakkında bilgi sağlayan, uygulanması çok basit ve ekonomik bir metodolojidir..
Bu anlamda herhangi bir laboratuvar bu renklendirmeyi yapabilir. Tabii ki, laboratuvarın mayalarını tanıyabilecek yetkin bir kadroya sahip olması gerekir. Cryptococcus neoformans izole edilmiş veya tomurcuklanan ve bunları, numunenin sunabileceği lökositlerden ve artefaktlerden ayırt etme.
indeks
- 1 Vakfı
- 2 Tekniği
- 2.1 Malzemeler
- 2.2 Örnekleme için özellikler
- 2.3 Tekniğin doğrudan örneklerle yürütülmesi
- 2.4 Tekniğin kültürden türler ile yürütülmesi
- 2.5 Mikroskopta gözlem
- 3 Avantajları
- 4 Dezavantaj
- 5 Hint mürekkebi ile doku boyama
- 6 Kaynakça
vakıf
Nigrosine ve Indian ink aynı şekilde davranır; bu nedenle, iki maddeden herhangi biri birbirinin yerine kullanılabilir.
Bu tekniğe negatif boyama denir çünkü diğer boyama tekniklerine aykırı davranır. Bu noktada, korunmasız kalan şey, aranan veya görmek istediğiniz yapıdır; yani, mikroorganizmalar.
Bu nedenle, renklenme, smear dibinin koyu renkte boyanmasına dayanır. Bu senaryoda, kapaklandırılmış yapılar açık veya renksiz renkte vurgulanır.
Genel olarak, maya, kapsüle karşılık gelen berrak bir halo ile çevrelenmiş olarak algılamaktadır. Bu, Çin mürekkebi ve nigrosininin, canlı mikroorganizmaların kapsülünü oluşturan polisakaritlere nüfuz edemeyen maddeler olması nedeniyle oluşur..
Lökositler veya kırmızı kan hücreleri gibi doğrudan örnekte bulunabilecek diğer yapıların nüfuz etmediğine dikkat etmek önemlidir..
Şimdi, eğer mikroorganizmalar ölmüşse, tentür içlerine nüfuz edebilir, öyle ki bu boyama mikroorganizmaların yaşayabilirliğini değerlendirmek için yararlıdır.
teknik
malzemeler
nigrosine
Nigrozin adını sahip olduğu siyah renge borçludur. Adı geçen reaksiyonda bir katalizör (demir veya bakır) kullanarak organik bileşiklerin (nitrobenzin, anilin ve anilin hidroklorür gibi) karışımının ısıtılmasıyla elde edilen sentetik bir maddedir..
Çince mürekkep
Çin mürekkebi, çoğunlukla Asyalılar tarafından yazı yazmak, sanat eserleri ve tek renkli resimler yapmak için kullanılan bir maddedir. Çin kültüründe çok popüler.
Toz haline getirilmiş kömürle karıştırılmış kalamar mürekkebi ile küçük reçineli ağaçların yakılmasının ürünüdür..
Hidrokarbonların (bitkisel yağların) yakılmasının kurumundan, karbon partiküllerinin çökelmesini önlemek için doğru kıvamı veren bir protein jelatinin yanı sıra hazırlanması da mümkündür..
Örnekleme için özellikler
- Oruç gerektirmez.
- CSF, balgam veya steril sıvı numunesi en az 1 ml hacim içermeli ve hemen laboratuvarda oda sıcaklığına aktarılmalıdır..
- BOS ve steril sıvı numuneler uzman doktor tarafından alınmalıdır.
- Aynı zamanda, yukarıda bahsedilen patojenlere bağlı şüpheli bir suşun saf bir kültürü olabilir..
Tekniğin doğrudan örneklerle yürütülmesi
- Numuneler santrifüjlenmeli, sonra süpernatan atılmalı ve sediment alınmalıdır.
- Bir damla santrifüjlenmiş malzeme (tortu) ve bir damla Çin mürekkebi veya nigrosin temiz bir slayta yerleştirilir..
- İyice karıştırılmalı ve bir kapak kayma ile kaplanmalı, böylece damlanın kenarları aşmadan ince bir film gibi yayılmasını sağlar..
- Daha sonra hazırlık mikroskopta monte edilir..
- Hazırlık çok koyu ise, suyla seyreltilebilir.
Tekniğin kültürden türlerle yürütülmesi
- Genç bir mahsulün çok küçük bir kısmı tohumlama iğnesi ile alınır ve daha önce temiz bir slayt üzerine yerleştirilmiş bir Çin mürekkebi damlası içinde çözülür..
- Bir lamel yerleştirilir.
- Mikroskopta 10X'de ve daha sonra 40X'de gözlenir..
Ayrıca koloninin bir bölümünü damıtılmış su içinde çözebilir ve oradan bir damla alabilir ve onu mürekkeple karıştırabilirsiniz. Bu şekilde, hazırlık o kadar kalın olmayacak ve izolasyondaki yapıların gözlemlenmesini mümkün kılacaktır; Topaklanma varsa, iyi gözlenmeyecektir.
Başka bir metodoloji şudur:
- Sürgünün bir ucuna süspansiyona kültürün bir damla yerleştirin.
- Aynı uca bir damla nigrozin koyun ve karıştırın..
- Başka bir slayt yardımıyla, örneği hematolojik bir smear yapıyormuş gibi uzatın.
- Kurumaya bırakın ve mikroskopta gözlemleyin.
Mikroskopta gözlem
Öncelikle, alanın geniş bir görüntüsünü elde etmek için 10X hedefi ile odaklanmalısınız. Daha sonra açık alanlar olup olmadığını araştırmalısınız; varsa, ayrıntıları görmek için 40X ile odaklanın.
fayda
- Yürütmek kolaydır.
- Bu ekonomik bir tekniktir.
- Bu yöntem, smear'in ısıya veya kimyasallara sabitlenmesini gerektirmez; bu nedenle, mikroorganizmalar bozulma olmadan gözlenir.
- Taze preparasyonun kurutulması gerekmez, bu nedenle hemen gözlenebilir, bu da hızlı bir şekilde sonuç üretebilir..
dezavantaj
Monte edildikten sonra, taze preparatlar derhal gözlenmelidir; Kurumasına izin verilirse, onları ve yeni bir şeyi gözlemlemek artık mümkün değildir..
Hint mürekkebi ile doku boyama
Çin mürekkebinin yerine getirebileceği diğer bir işlev patoloji laboratuvarlarındadır. Bu, tümör rezeksiyonu sınırlarını işaretlemek için cerrahi olarak çıkarılmış doku numunelerine uygulanır.
İşaretli doku asetik asit ile püskürtülür. Bu bir mordan görevi görür ve doku biyopsi hazırlığı için rutin işlemeye tabi tutulduğunda mürekkebin çıkmasını önler.
İşlem, dokunun alkol ve ksilen içinde yıkanmasından ve ardından parafin balmumu içine emilmesinden oluşur. Bu işaret, dokuyu gözlemlerken patolojiyi yönlendirerek, cerrahi rezeksiyon veya diğer ilgi çekici noktaların sınırının nerede olduğunu gösterir..
referanslar
- "Nigrosine". Vikipedi, özgür ansiklopedi. 11 Tem 2017, 22:46 UTC. 6 Ocak 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "Çin mürekkebi". Vikipedi, özgür ansiklopedi. 1 Ekim 2018, 03: 08 UTC. 6 Ocak 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macias J ve ortak çalışanlar. (2006). Extremadura Özerk Topluluğu Çalışma Personeli. Özel gündem Cilt IV. Editörden MAD. Sevilla-İspanya, s. 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) Galiçya Sağlık Servisi (SERGAS) uzman laboratuar teknisyeni. Konuya özel cilt hacmi 2. Editörden MAD. Sevilla-İspanya, s. 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott'un Mikrobiyolojik Tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden