Tetrathionate broth vakfı, hazırlanması ve kullanımı

tetrationate suyu veya TT suyu, Salmonella suşlarının zenginleştirilmesi ve geri kazanılması için seçici bir sıvı kültür ortamıdır. Müeller tarafından yaratılmış ve daha sonra Kauffmann tarafından değiştirilmiş, bu nedenle buna Müeller-Kauffmann suyu demiş olanlar var..

Orijinal ortam proteoz peptonları, kalsiyum karbonat ve sodyum tiyosülfat içermiştir. Kauffmann safra tuzları ekledi ve parlak yeşil ile başka bir yöntem yarattı. Bu maddeler, koliformların büyümesini engeller, patojenik bakteri gelişimi için serbest ortamı bırakır, bu durumda Salmonella.

Değişiklik çok başarılı geçti çünkü ortamın hassasiyetini önemli ölçüde arttırdı. Bu nedenle, şu anda herhangi bir numunede Salmonellaların aranmasında, ancak özellikle katı veya sıvı dışkıların ve yiyeceklerin aranmasında faydalıdır..

Hazırlanması iki aşamadan oluşur; ticari ortam, tetratiyonat et suyunun hazırlanması için bir bazdır ve daha sonra oluşturulacak tetratiyonat için, besiyerini tamamlamak üzere iyotlu bir iyot çözeltisi ilave edilir..

Amerikan Halk Sağlığı Birliği (APHA), tetrationat et suyundan ve selenit et suyundan daha seçici olduğu için Salmonella'nın araştırılmasında örneklerin zenginleştirilmesi için parlak yeşil ile desteklenmiş tethionate et suyunun kullanılmasını önerir..

Genel olarak, tetrationat çorbası, Salmonella cinsinin bakterilerinin küçük miktarlarda olduğundan şüphelenildiği veya inhibe edici maddelere maruz bırakılması veya yaşayabilirliğini en aza indiren endüstriyel işlemlerle kötüye kullanılması durumunda idealdir..

indeks

• 1 Vakfı
• 2 Hazırlık
  • 2.1 - Tetrationat
  • 2.2 -Variante tetrathionate et suyu ile parlak yeşil
• 3 kullanım
• 4 kalite kontrol
• 5 Tavsiye
• 6 Kaynakça

vakıf

Mevcut peptonlar kazein pankreas sindirimlerine ve hayvan dokusunun peptik sindirimine karşılık gelir. Bunlar bakteriyel gelişim için genel olarak karbon, azot ve besin kaynaklarını sağlar.

Sodyum tiyosülfat, tetrationat oluşturmak için iyotlu çözeltiyle reaksiyona girer. Bu, koliformların büyümesini inhibe eder ve tetrathionat redüktaz enzimini içeren bakteri gelişimini destekler, bunlar arasında Salmonella cinsidir, fakat aynı zamanda Proteus.

Safra tuzları ayrıca çoğu Gram pozitif bakterinin ve bazı Gram negatif bakterilerin (koliformlar) inhibe edici maddesi olarak da işlev görür..

Kalsiyum karbonat, sülfürik asit oluşturan tetratiyonatın ayrışmasından kaynaklanan toksik maddeleri emer. Bu anlamda, kalsiyum karbonat, kararlı ortamın pH'sını koruyarak asitliği nötralize eder.

Parlak yeşil mod söz konusu olduğunda, bu madde, Salmonella cinsi dışındaki diğer mikroorganizmaları inhibe ederek tetrationat et suyunun seçici gücünü arttırır..

hazırlık

-Tetrationate suyu

İyot iyot çözeltisi

pişmanlık:

• 6 gr iyot.
• 5 gr potasyum iyodür.

Potasyum iyodür yaklaşık 5 ml steril damıtılmış su içinde çözülür, daha sonra karışım ısıtılırken iyot azar azar ilave edilir. Tamamen çözüldükten sonra, 20 ml nihai hacme ulaşana kadar steril damıtılmış su ile doldurulur..

Tetrathionat suyu için yarım baz

Susuz ortamın 46 gramını tartın ve 1 litre steril damıtılmış su içinde süspanse edin. Tamamen eriyene kadar karıştırın ve ısıtın, sadece birkaç dakika kaynatın. Otoklavda sterilize etmeyin. Ortamın bazının yaklaşık 45 ° C'ye soğumasına izin verilir ve o sırada 20 ml iyotlu çözelti ilave edilir..

Solüsyonu ekledikten sonra ortama iodurada derhal kullanılmalıdır. Tüm karışımı kullanmak istemiyorsanız, aşağıdakileri uygulayın:

10 ml baz ortam tüplere dağıtılır ve numunelerle aşılanacak olanlara sadece 0,2 ml iyotlu çözelti ilave edilir..

Kullanılmayacak olanlar hala buzdolabında saklanabilir, ancak ortam sterilize edilmediğinden ideal olan gereken tam miktarı hazırlamaktır..

İyotlu iyot çözeltisinin eklenmesinden önce ortamın rengi beyaz çökeltiyle süt beyazı ve ilave edildikten sonra yoğun bir çökeltiyle kahverengidir. Gözlenen çökelti normaldir ve çözünmeyen kalsiyum karbonata karşılık gelir. Ortamın son pH değeri 8.4 ± 0.2'dir..

-Parlak yeşil renkte Tetrathionate et suyu çeşidi

Tetrathionate et suyunu parlak yeşil ile hazırlamak için yukarıda tarif edilen tüm adımlar yerine getirilir, ancak ilave olarak, karışıma% 0.1'de hazırlanan 10 ml parlak yeşil çözelti ilave edilir..

Parlak yeşil

Bu çözelti aşağıdaki gibi hazırlanır:

0.1 g parlak yeşil tartın ve 100 ml damıtılmış su içinde süspanse edin. Tam çözünme elde etmek için kaynayana kadar ısıtın. Kehribar şişesinde tasarruf edin.

kullanım

Dışkı örnekleri (dışkı kültürü) için protokol aşağıdaki gibidir:

10 g kullanıma hazır tetratiyonat et suyuyla bir tüp içinde 1 g katı dışkı veya 1 ml sıvı dışkı inoküle edin. Kuvvetlice çalkalayın ve aerobiyozda 43 ° C'de 6-24 saat inkübe edin.

Daha sonra, et suyunun 10 ila 20 ul alikotunu alın ve SS agar, XLD agar, parlak yeşil agar, Hektoen enterik agar gibi Salmonella için seçici bir besiyerinde alt kültürleyin..

Paralel olarak, Salmonella için seçici ortam, zenginleştirme olmadan doğrudan numune (dışkı) ile aşılanmalıdır. Rektal swab örnekleri için, tüpte toplanan materyali indirin ve yukarıda açıklandığı gibi devam edin..

Gıda numuneleri için 10 g katı yiyecek veya 10 ml sıvı yiyecek tartın ve bir şişeyi 100 ml kullanıma hazır tetrationat et suyu ile inoküle edin. Yukarıda anlatıldığı şekilde devam edin ancak 37 ° C'de inkübe edin.

Görülebileceği gibi, örnek ve çorba arasındaki ilişki her zaman 1:10.

Kalite kontrol

Kültür ortamını test etmek için bilinen kontrol türleri kullanılabilir. En yaygın kullanılan ATCC sertifikalı suşlardır.

Kullanılacak suşlar Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abanoz DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ve Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonella suşları için mükemmel bir gelişme beklenirken Escherichia coli Zayıf veya düzenli bir gelişime sahip olabilir ve Gram pozitif suşları (Enterococcus ve Staphylococcus) kısmen veya tamamen inhibe edilir..

tavsiyeler

-Bu ortam Proteus'un büyümesini inhibe etmediğinden, bazı laboratuarlar bu mikrobiyal suşun gelişmesini önlemek için 40 mg / L novobiosin kullanır. İyotlu iyot çözeltisi önce antibiyotik eklenmelidir.

-İyotlu iyot çözeltisini içeren besiyerini hazırladıktan sonra, aşılamadan sonra 2 saatten fazla olmamalıdır.

-Ortamı borulara dağıtma anında, oluşan çökeltiyi yeniden süspanse etmek için karışım sürekli olarak homojenize edilmelidir.

-Daha az kontamine olmuş numunelerde, tetrationat çorbası, 35-37 ° C'de inkübe edilir ve yüksek derecede kontamine olmuş numunelerde, 43 ° C'de inkübasyon önerilir..

referanslar

1. Conda Pronadisa Laboratuvarı. 2010. Müeller-Kauffmann'a göre tetrationat et suyu üssü. Mevcut:
2. BD Laboratuvarları 2003. Tetrathionate Broth Base. Mevcut:
3. Laboratuvarlar Britania. 2015. Tethionate et suyu baza. Mevcut:
4. Medya BBL. 2005. Salmonella türlerinin kültivasyonu için tüp preparatları.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Her ikisi de 37 ° C ve 42 ° C'de kuluçkalanan sodyum selenit ve tetrationat kültür ortamı arasındaki karşılaştırma izolasyonu Salmonella spp taşıyıcı tabureler. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220