Üre çorbası vakfı, hazırlanması ve kullanımı

üre suyu Bazı mikroorganizmalarda üreaz enziminin varlığını göstermek için kullanılan sıvı bir kültür ortamıdır. Üre, yapısal olarak üretilen mikrobiyal bir enzimdir, yani üzerinde çalıştığı substratın mevcut olup olmamasından bağımsız olarak sentezlenir..

Üreazın fonksiyonu, organik bileşiklerin ayrışması ile ilgilidir. Tüm mikroorganizmalar bu enzimi sentezleyememektedir, bu nedenle laboratuvardaki kararlılığı bazı bakteri suşlarının belirlenmesine ve hatta aynı cinsin türlerinin ayırt edilmesine izin vermektedir..

İki tür üre testi vardır: Stuart ve Christensen. Kompozisyonları ve hassasiyetleri bakımından farklıdırlar. İlki, Proteus cinsinin türlerinin ürettiği üreaz miktarını göstermesi için özeldir..

İkincisi daha hassastır ve Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter ve Mycobacterium gibi diğer bakteri türleri tarafından geç üretilen üreaz az miktarlarını tespit edebilir.

Stuart üre suyu, üre, sodyum klorür, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat, maya özütü, fenol kırmızısı ve damıtılmış sudan oluşur..

Christensen broth veya agar üre, peptonlar, sodyum klorür, monopotasyum fosfat, glukoz, üre, fenol kırmızısı, damıtılmış su ve agar-agardan oluşur. İkincisi, yalnızca katı ortam ise.

indeks

• 1 Vakfı
  • 1.1 Stuart üre suyu
  • 1.2 Christensen suyu veya agar üre
  • 1.3 Her iki medyanın yorumu (Stuart ve Christensen)
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Stuart üre suyu
  • 2.2 Christensen suyu veya agar üre
• 3 Kullanım
• 4 Üre testinin ekimi
• 5 kalite kontrol
• 6 Kaynakça

vakıf

Üreaz enzimi karbon dioksit, su ve iki amonyak molekülü oluşturmak için üre hidrolize eder. Bu bileşikler, amonyum karbonat adı verilen nihai ürünü oluşturmak için reaksiyon gösterir..

Stuart üre suyu

Stuart üre suyu, pH 6.8 ile daha fazla tamponlanır. Bu nedenle, mikroorganizmanın fenolü kırmızıya dönüştürmek için büyük miktarda amonyum oluşturabilmesi gerekir. PH 8'in üzerine çıkmalı.

Bu nedenle, Stuart üre suyu, Proteus türleri için seçicidir, 24 ila 48 saatlik inkübasyonda pozitif sonuçlar verir ve düşük miktarda üreaz üreten veya yavaşça üre hidrolize eden bakteriler için etkili değildir.

Bunun nedeni, Proteus türlerinin azot kaynağı olarak üre kullanabilmeleridir. Aksine, üreaz üreten diğer bakterilerin ek bir kaynağa ihtiyacı vardır.

Bununla birlikte, Pérez ve ark. (2002), Stuart üre et suyunun, Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon ve Saccharomyces cinslerinin maya suşlarındaki üreazlarını belirlemek için Christensen'dan gelen üre agar kadar etkili olduğunu belirledi..

Çalışmanın yazarları 24 ve 48 saat boyunca inkübe ederek her iki medyada (Stuart ve Christensen)% 100 tesadüf sağladığını iddia etmişlerdir; Medyayı güçlü bir pembe-fuşya rengine dönüştürmeyi başaran suşları pozitif almaları şartını uyandırmak.

Bu açıklama gereklidir, çünkü Lodder (1970) hemen hemen tüm mayaların Christensen'ın üre ağarının eğimini pembeye solmaya koyduğunu doğruladı. Bunun nedeni, üreyi minimum miktarlarda hidrolize edebilmeleri ve amino asitlerin yüzeydeki oksidatif dekarboksilasyonu ile amin oluşumuna neden olmalarıdır. Bu olumlu olarak yorumlanmamalıdır.

Christensen'dan Broth veya üre ağarı

Christensen üre suyu veya agar az miktarda amonyum tespit edebilen daha az tamponlanır. Ek olarak, bu ortam peptonlar ve glikoz ile zenginleştirilmiştir. Bu bileşikler, Stuart broth bölgesinde yetişmeyen üreaz üreten diğer mikroorganizmaların gelişmesine neden olur..

Aynı şekilde, Christensen üre testi, özellikle Proteus için, en az 30 dakika, en çok 6 saat kadar yüksek bir sürede pozitif pozitif sonuç verebilmeleri için daha hızlı sonuçlar sunar..

Üreaz üreten mikroorganizmaların geri kalanı ortamın rengini 6 saatten biraz sonra ve 24, 48, 72 saat veya daha uzun bir süre sonra kuvvetle çevirmeyi başarır ve hatta bazı suşlar bile 5 veya 6 gün sonra zayıf reaksiyonlar verebilir.

Her iki medyanın yorumu (Stuart ve Christensen)

Ortam orijinal olarak sarı-turuncu renktedir ve pozitif bir reaksiyon ortamın rengini pembe-fuşyaya çevirir. Rengin yoğunluğu, üretilen amonyum miktarı ile doğru orantılıdır..

Negatif bir reaksiyon, Christensen üre agarı ile soluk pembe rengi veren mayalar hariç, orijinal rengin ortamını bırakacaktır..

hazırlık

Stuart üre suyu

Gerekli gramları ticari evin göstergelerine göre tartın. Tercihen steril distile su içinde eritilir. Çözündürmek için ısı kullanmayın, çünkü üre ısıya duyarlıdır.

Membran filtrasyon yöntemi sterilize etmek için kullanılır. Bunun için, çapı 0.45 μ gözenekli bir Millipore filtresi kullanılır. Otoklav kullanmayın. Solüsyon filtre edildikten sonra steril tüplere dağıtılır. Güvenilir sonuçlar elde etmek için tüp başına minimum miktar olarak 1.5 ml, maksimum miktar olarak 3 ml'ye aktarılmalıdır..

Kullanmadan önce buzdolabında saklayın.

Filtreleme yöntemi mevcut değilse, güvenilir sonuçlar elde etmek için besiyeri derhal kullanılmalıdır..

Üre Stuart broth'u hazırlamanın bir başka yolu ise şöyle:

Bazı ticari evler üre hariç, üre testi için yarım taban satar.

Ticari ev tarafından belirtilen miktar tartılır. Damıtılmış suda çözülür ve otoklavda 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edilir. Biraz dinlendirin ve ortam sıcakken,% 20 oranında hazırlanan ve süzülerek sterilize edilen 100 ml üre çözeltisi ekleyin..

Daha önce tarif edildiği gibi steril tüplerde dağıtılır.

Christensen'dan Broth veya üre ağarı

-Üre çözeltisinin hazırlanması

29 gram susuz üre tartılır ve 100 ml damıtılmış su içinde çözülür. Sterilize etmek için filtrasyon yöntemini kullanın. Otoklav etmeyin.

-Üre baz agar

Susuzlaştırılmış baz agarın 24 gramını 950 ml distile su içinde çözün. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. 50 ° C sıcaklığa ulaşana kadar bekletilir ve önceden hazırlanmış üre aseptik olarak eklenir.

Steril tüplere 4 ila 5 ml dökün ve katılaşana kadar eğin. Uzun bir oluk tepe olmalı.

Bu ortam aynı zamanda sıvı halde de hazırlanabilir.

uygulamaları

Üre testi, Proteus cinsinin Proteus tarafından sağlanan hızlı reaksiyonu verilen, Enterobacteriaceae Familyası'nın diğer cinslerinden ayrılmasında son derece etkilidir..

Christensen bileşimi kullanılırsa, test aynı cinsin türlerini ayırt etmeye yardımcı olur. Örneğin, S. haemolyticus ve S. warneri süzerinde stafilokok koagülaz negatif ve betahemolitik, ama bu konuda farklı S. haemolyticus negatif üre ve S. warneri pozitif üre.

Öte yandan, McNulty başarıyla varlığını incelemek için başarıyla% 2 Christensen üre suyu kullandı Helicobacter pylori mide mukozasından alınan biyopsi örneklerinde (antral bölge).

Varlığı H. pylori pozitif bir üre testi ile kanıtlanmıştır. Sonuçları gözlemleme süresi, mevcut mikroorganizmaların miktarı ile doğru orantılıdır..

Görülebileceği gibi, tanı için basit bir yöntemdir Helicobacter pylori mide biyopsilerinde.

Son olarak, bu test, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus ve Mycobacteria cinslerinin türlerini ayırt etmek için de faydalıdır..

Üre testi Ekim

İki yöntem, sonuçları optimize etmek için güçlü bir mikro aşı maddesi gerektirir. Bakteriyel koloniler tercihen bazı istisnalar dışında kan agarı ve Sabouraud agar mayalarından alınır. Aşı sıvı ortamda emülsifiye edilir.

Stuart üre suyu için, 37 ° C'de 24 ila 48 saat kuluçkada bırakıldı; bu, birinin yalnızca bir bakteri olduğunda Proteus cinsinin suşlarını aradığını bilmek. Mayalarda, 37 ° C'de veya 24 ila 48 saat inkübasyon için oda sıcaklığında inkübe edilebilir..

Christensen üre suyu durumunda, 37 ° C'de 24 saat inkübe edin. Test negatif ise, 6 güne kadar inkübe edilebilir. Test 6 saatten önce pozitifse, Proteus cinsinin bir cinsi olduğunu gösterir..

Christensen üre agarı durumunda, agar konikliği delinmeden kuvvetlice aşılanır. Et suyu aynı şekilde inkübe edilir ve yorumlanır.

Kalite kontrol

Kontrol türleri, ortamları test etmek için kullanılabilir; Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 ve Salmonella typhimurium.  İlk iki pozitif sonuç ve son iki olumsuz sonuç vermelidir.

referanslar

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Kolella M, Reyes H. et al. Stuart üre et suyunun üreaz testi için, mayaların teşhisinde bir test olarak kullanılması. Rev. Soc. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140 sayılı belgeler. Erişim: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
5. Laboratuvarlar Britania. Christensen Medio (Üre agar üssü) 2015. Erişim tarihi: britanialab.com