EC Broth Vakfı, hazırlanması ve kullanımı

EC suyu veya et suyu Escherichia coli Seçici bir sıvı kültür ortamıdır. Bu besiyeri, toplam ve fekal koliformların sayımı için Standart Metotlar tarafından, su ve yiyecek numunelerinde en muhtemel sayının (NMP) tekniğinin kullanılmasıyla tavsiye edilir. Escherichia coli.

EC suyu, triptein, laktoz, safra tuzları, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat, sodyum klorür ve sudan oluşur. Formülü, toplam ve fekal koliformların büyümesini desteklemek ve beraberindeki diğer mikroorganizmaların gelişimini önlemek için stratejik olarak tasarlanmıştır..

Bakteri Escherichia coli Su ve besin kaynaklarında kirletici olarak bulunan ve önemli gastrointestinal etkilere neden olan ana fekal koliform..

Bir çok serotip olduğu not edilmelidir. Escherchia coli; bunlar arasında enterohemorajik (EHEC), enteroinvaziv (EIEC), enteropatojenik (EPEC), enterotoksijenik (ETEC) ve enteroagregatif (EAEC) 'den bahsedebiliriz..

Bu, hepsinin gelişmesine izin verecek kapasiteye sahiptir, ancak bunlar arasında ayrım yapamaz. Bunu yapmak için ek testler yapılmalıdır.

Toplam ve fekal koliformların aranması için su ve yiyeceğin mikrobiyolojik olarak araştırılması en muhtemel sayıda (NMP) yapılır; varsayımsal aşama, onaylama aşaması ve tamamlama aşaması. EC suyu doğrulayıcı aşamada kullanılır.

indeks

• 1 Vakfı
  • 1.1 EC Et suyu
  • 1.2 novobiocin ile değiştirilmiş EC broth
• 2 Hazırlık
  • 2.1 EC suyu
  • 2.2 EC çorbası, novobiocin ile modifiye edilmiş
• 3 kullanım
  • 3.1 Toplam ve dışkı koliformların analizi
• 4 kalite kontrol
• 5 Tavsiye
• 6 Kaynakça

vakıf

EC Broth

EC ortamı, bakterinin dahil olduğu toplam ve fekal koliformların optimal gelişimi için gerekli besin öğelerini sağlamaya dayanır. Escherichia coli.

Bu besin elementleri, mükemmel bir peptit ve amino asit kaynağı olan triptein ile sağlanır. Ek olarak, enerji sağlayan fermente edilebilir bir karbonhidrat olan laktoz da içerir ve bakterilerin gaz üretip üretmediğini göstermeyi sağlar.

Öte yandan, ortam, seçici karakter sağlayan safra tuzları içerir, çünkü numunede bulunabilecek Gram-pozitif mikroorganizmaların büyümesini inhibe eder..

Aynı şekilde, dipotasyum fosfat ve monopotasyum fosfat, bir pH dengeleme sistemi olarak işlev görür. Bu sistem gereklidir, çünkü et suyunda bulunan laktoz, mikroorganizmalar tarafından fermente edildiğinde besiyerini asitleştirme eğilimindedir, ancak bu, fosfat tuzları ile telafi edilir..

Bu nedenle, bu elementler çok önemlidir, çünkü kontrolsüz asitlik, aranan mikroorganizmaların doğru gelişimini etkileyebilir.

Sodyum klorür kendi kısmı için ortamı ozmotik olarak stabilize ederken, su mevcut çözünenlerin çözücüsüdür ve sıvının ortama tutarlılığını sağlar.

EC çorbası, novobiocin ile modifiye edildi

Okrend ve Rose, novobiocin ile modifiye edilmiş EC suyu adı verilen çeşitli EC suyu türleri yarattı. Modifikasyon, safra tuzlarının konsantrasyonunun azaltılmasından ve 20 mg / dl novobiyosin eklenmesinden oluşuyordu..

Bu değişiklik, türlerin iyileşmesini kolaylaştırır. Escherichia coli enterohemorajik (O157: H7).

Bu bakteriyel serotip, hemolitik üremik sendroma (HUS) neden olabilecek ciddi hemorajik kolite neden olur; sırayla akut böbrek yetmezliği yaratabilir, yaşlılarda% 50'ye varan ölüm oranı yüksek.

Bu bakteri tarafından her yıl kontamine gıda tüketiminden kaynaklanan morbidite ve mortalite nedeniyle, ABD Tarım Bakanlığı (USDA) bu araçların kullanımını yaygın olarak önermektedir..

hazırlık

EC Broth

Susuz ortamdan 37.4 gr ağırlığında ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışım 5 dakika dinlenmeye bırakılmalıdır. Daha sonra, bir ısı kaynağında eritilir, sıklıkla.

Çözündükten sonra, daha önce içinde bir Durham tüpüyle şartlandırılmış test tüplerine dağıtılır. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Ortamın pH'ı 6.9 ± 0.2 olmalıdır. Susuz ortamın rengi bej ve hazırlanmış açık sarıdır.

Şaraplar, kullanılıncaya kadar buzdolabında saklanır. Kullanım anında et suları oda sıcaklığında olmalıdır..

Öte yandan, EC suyu da iki konsantrasyonda hazırlanabilir.

EC çorbası, novobiocin ile modifiye edildi

Susuz ortamın 36.7 gramını tartın ve 1 litre suda çözün. Preparatın geri kalanı yukarıda tarif edilenle aynıdır.

kullanım

Toplam ve fekal koliformların analizi

EC suyu, farmasötik ürünlerde ve gıdada olduğu gibi, hem su örneklerinde hem de NMP yöntemiyle koliformların çalışmasının doğrulayıcı aşaması için idealdir..

Varsayım aşamasında elde edilen tembel bulanık ve gaz üretim suları% 2 parlak yeşil safra ve EC et suyunda yeniden tohumlanmalıdır.

Toplam koliformlar için EC çorbaları aerobiyozda 24 ila 48 saat 37 ° C'de, fekal koliformlar için aerobiyozda 24 ila 48 saat 44 ° C'de inkübe edilir.

Her iki durumda da şu şekilde yorumlanır: Gaz üretimi olan bulanık borular pozitif olarak kabul edilir. 24 saat içinde gaz üretimi olmazsa, inkübasyon 48 saate kadar devam eder.

EC pozitif et suyu, Mac Conkey agar, EMB agar veya Endo agar gibi seçici ortamlarda yeniden tohumlamadan oluşan tam doğrulama aşamasına geçer..

Kullanılan et suyu novobiocin ile değiştirilmiş EC ise, pozitif tüplerin sorbitol ile Mac Conkey agar'da tekrar tohumlanması önerilir.

Kalite kontrol

Hazırlanan besiyerinin her partisinde kalite kontrolü yapılmalıdır. İlk olarak, ortamın sterilitesi değerlendirilmelidir. Bu anlamda, bir veya iki çorba 37 ° C'de 24 saat boyunca aerobiyozda inoküle edilmeden inkübe edilir Beklenen sonuç, bulanıklık veya renk değişikliği olmadan şeffaf bir et suyu.

İkincisi, aşağıdaki tür bakterilerin kullanılabileceği bilinen türlerin büyümesi değerlendirilmelidir: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Tüm durumlarda, bunun için gaz üretimi olan bulanık bir suyu gözlemleyerek tatmin edici bir mikrobiyal gelişme beklenmektedir. E. coli Salmonella için gazsız ve gazsız.

Kontrole dahil edilebilecek diğer suşlar: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Bu suşlar tamamen inhibe edilmelidir.

tavsiyeler

-Durham tüplerinin yerleştirilmesi koliformların incelenmesi için esastır.

-Sterilize etmeden önce ortamı asla test tüplerine dağıtın.

-Ortamın 3 aydan fazla hazırlığı varsa kullanmayın..

-Ortamın normal özelliklerinde herhangi bir değişiklik varsa kullanmayın..

referanslar

1. Laboratuvarlar Britania. EC Orta. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
2. E. coli enterohemorrhagic. Gıda güvenliği ve halk sağlığı merkezi. 2010. Uygun fiyat: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Şirketi. Orta EC Erişim: foodsafety.neogen.com
4. Neojen. Orta EC, novobiocin ile modifiye edilmiştir. Erişim: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Çene I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Tespiti, izolasyonu ve karakterizasyonu Escherichia coli Tucumán eyaletinin Concepción kasabasındaki taze kıymalardan Shiga toksin üreticisi. Arg'den Rev Microgol; 2010, 42 (4): 284-287 sayılı belgeler. Erişim: www.scielo.org.