Agar TSI Vakfı, hazırlanması ve kullanımı



TSI ağar veya demir üçlü şeker agar, Gram negatif basillerin başlangıçtaki tanımlanmasına rehberlik etmek için biyokimyasal bir test görevi gören katı bir kültür ortamıdır. Mevcut şekerlerin fermantasyonunu ve hidrojen sülfür ve gaz üretimini kanıtlamaya dayanmaktadır..

Kompozisyonu ve temeli Kligler demir testine çok benzer, ikincisi sadece glukoz ve laktoz içermektedir. Bunun yerine, adından da anlaşılacağı gibi, üçlü demir demir üç mayalanabilir karbonhidrat içerir: glukoz, laktoz ve sukroz..

Ek olarak, TSI ortamı onu çok besleyici bir agar yapan dört protein türevine sahiptir: maya özü, et özü, pepton ve proteoz pepton. Aynı zamanda demir içeren amonyum sülfat, sodyum tiyosülfat, sodyum klorür, fenol kırmızısı ve agar içerir.

Bir mikroorganizmanın besiyerinde mevcut glikozu mayalayamaması, onu hemen Enterobacteriaceae familyasına ait olma dışında bırakır. Bu nedenle, bu test cins ve türlerin belirlenmesi için hangi tanımlama yolunun alınması gerektiğine karar vermek için şarttır..

Her laboratuvar TSI agar veya Kligler agar agar ile çalışıp çalışmadığına karar verir..

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 Sodyum klorür ve agar
    • 1.2 pH göstergesi (fenol kırmızısı)
    • 1.3 Protein türevleri (maya özü, et özü, pepton ve proteoz pepton)
    • 1.4 Karbonhidratların fermentasyonu (glukoz, laktoz ve sukroz)
    • 1.5 Gaz üretimi
    • 1.6 Sodyum tiyosülfat ve demir amonyum sülfat (hidrojen sülfit üretimi)
  • 2 Hazırlık
  • 3 Kullanım
  • 4 Tohumlu
  • 5 Sınırlamalar
  • 6 Kaynakça

vakıf

Bileşiklerin her biri ortam içinde bir işlevi yerine getirir.

Sodyum klorür ve ağar

Sodyum klorür, ortamın ozmotik dengesini korumak için gereklidir. Agar sağlam bir tutarlılık verirken.

PH göstergesi (fenol kırmızısı)

Hazırlanan ortamın pH'ı 7.3'e denir ve pH göstergesi (fenol kırmızısı) 6.8'in altına sarıya döner. Bu, şekerlerin fermantasyonu ile üretilen az miktarda asidin, ortamı kırmızı-turuncudan sarıya döneceği anlamına gelir..

Eğer fermantasyon gerçekleşmezse, peptonların kullanımıyla besiyerinde alkalileşme olur, kırmızı-turuncudan koyu kırmızıya dönüşür.

Protein türevleri (maya özü, et özü, pepton ve proteoz pepton)

Bakteriler TSI agar içinde mevcut olan proteinleri metabolize ettiğinde, reaksiyonu oksijene ihtiyaç duyduğu için besiyerini alkalileştiren aminler üretilir (esas olarak konik seviyede). Aminenler, çerçeveyi güçlü kırmızıya dönüştürür.

Ancak bu, bakterilerin karbonhidratları fermente etme veya etmemesine bağlı olacaktır..

Karbonhidratların fermentasyonu (glukoz, laktoz ve sukroz)

Şekerlerin fermantasyonunun incelenmesi birkaç görüntü verebilir ve her biri farklı şekilde yorumlanır. Testin yorumlanması, mikroorganizmaları 3 kategoriye ayırır: glikoz olmayan fermentörler, laktoz olmayan fermentörler ve laktoz / sakroz fermenterleri.

Ortamdaki glikoz miktarının sınırlı olduğu, laktoz ve sukroz konsantrasyonunun 10 kat daha yüksek olduğu not edilmelidir..

Enterobacteriaceae familyasının ve diğer glikoz fermente edici mikroorganizmaların bakterileri bu şekeri mayalamaya başlar, çünkü enerji için en basit karbonhidrattır..

Öte yandan, laktoz ve sukroz, Embden-Meyerhof döngüsüne girebilmeleri için parçalanması ve glikoza dönüştürülmesi gereken kompleks karbonhidratlardır..

-Fermente olmayan glikoz mikroorganizmaları

Aşılanan mikroorganizma glikozu fermente edemediğinde, diğer karbonhidratları çok daha az fermente edebilir. Bu nedenle, burada asitler oluşmaz, ancak pepton kullanımından dolayı eğimde amin oluşumu vardır..

Bu durumda, eğim daha güçlü bir kırmızıya döner ve borunun tabanı değişmeden kalabilir veya tüm kırmızı boruyu bırakarak alkalize edilebilir..

Yorum: K / K, alkalin konik / alkalin veya nötr arka plan anlamına gelir

Makalenin başlangıcındaki resimde D tüpünün resmine bakın.

Bu sonuç mikroorganizmanın Enterobacteriaceae familyasına ait olmadığını göstermektedir.

-Laktoz / sukrozun fermente olmayan mikroorganizmaları

Bakteriler glikozu fermente edebiliyor ancak laktoz veya sukrozu feragat edebiliyorsa, aşağıdakiler gerçekleşecektir:

Bakteri yaklaşık 6 ila 8 saat sonra mevcut tüm glikozu tüketecek, hem eğimi hem de tacoyu asitleştirebilecektir; yani, ağar tamamen sararmış olacak. Fakat glikoz tükendiğinde ve laktoz ve sukroz kullanamadığında, bakteri proteinlerin metabolizmasına başlayacaktır..

Bu reaksiyon oksijene ihtiyaç duyar, bu nedenle peptonların bozulması yüzeyde meydana gelir (eğim). Üretilen aminler, sarıyı kırmızıya döndürerek çerçeveyi alkalize eder. Bu reaksiyon 18 ila 24 saatlik inkübasyonda kanıtlanmıştır.

Yorum: K / A, alkalin konik ve asit taco anlamına gelir.

Makalenin başındaki görüntüde B tüpünün görüntüsüne bakınız..

-Laktoz / sakaroz fermente edici mikroorganizmalar

Açıkçası, laktoz ve sakaroz fermente edebilen mikroorganizmalar glikozu fermente edebilir. Ortamda bulunan minimum glikoz miktarı tükendikten sonra, oluşan piruvat, Krebs'in aerobik döngüsü boyunca asitler oluşturmak üzere metabolize olmaya başlar ve 8 ila 12 saatlik bir süre zarfında, tüm ortam sarı olur.

Bakteriler laktoz veya sakarozu ayırabilirse, asitler üretilmeye devam eder ve 18 ila 24 saat sonra tüm tüp - gaga ve taco - sarı kalır.

Glikoz kullanımının iki şekilde yapıldığı not edilmelidir: biri borunun eğiminde aerobik formda, diğeri ise borunun dibinde anaerobik olarak.

Yorum: A / A, asit konik / asit alt anlamına gelir. Gaz verebilir veya veremez.

Makalenin başlangıcındaki resimde, A tüpünün resmine bakın..

Gaz üretimi

Bazı mikroorganizmalar şekerlerin fermantasyonu sırasında gaz üretme kabiliyetine sahiptir. Gaz, tüp içinde agarın içine uyguladığı basınçla kanıtlanır. Basınç, kabarcık oluşumuna veya agarın yer değiştirmesine neden olur. Bazen gaz oluşumu besiyerini kırabilir.

TSI ortamını tohumlama zamanında, delinmenin dibine ulaşana kadar agarın merkezi tarafından temiz bir şekilde yapılması önemlidir. Delinme borunun çeperlerine doğru yönlendirilirse, yanlış oluşturulmuş kanaldan kaçacağı için, gaz üretiminde yanlış pozitiflere neden olabilir..

Gaz üretimi ve aynı zamanda ağar eğiminde meydana gelen reaksiyonlar, oksijene ihtiyaç duyar, bu nedenle tüpün pamuklu bir tıkaç ile örtülmesi tavsiye edilir ve eğer bir bakalit kapak kullanılıyorsa, tam olarak ayarlanmaması gerekir..

Gaz üretimi pozitif (+) veya negatif (-) olarak rapor edilir..

Sodyum tiyosülfat ve demir amonyum sülfat (hidrojen sülfit üretimi)

Hidrojen sülfit (renksiz gaz) üretebilen bakteriler, ortamda bulunan sodyum tiyosülfat sülfürünü alır. H oluştuğunda2S, demir sülfür üreterek, demir amonyum sülfatla reaksiyona girer (açıkça siyah görünür çökelti).

H üretimi2S pozitif (+) veya negatif (-) olarak bildirilir.

Makalenin başındaki görüntüde C tüpünün görüntüsüne bakınız..

hazırlık

62.5 gr kurutulmuş üçlü şeker şekeri (TSI) agarı tartın ve bir litre distile su içinde eritin.

Agar tamamen eriyene kadar ısıtın. Sık karıştırarak bir dakika kaynatın. Pamuk kapaklı 13/100 test tüplerinde 4 ml ortamın dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve eğimli bir şekilde dinlenmeye bırakın. Hem tabanın hem de çerçevenin aynı mesafeye sahip olmasına dikkat edin.

Buzdolabında 2-8 ° C saklayın Bakteriyel suşu ekmeden önce tavlanmaya izin verin.

Susuz ortamın rengi açık bej ve hazırlanan ortam kırmızı-turuncudır

Hazırlanan ortamın son pH değeri 7.3 ± 0.2'dir..

uygulamaları

TSI testi mikrobiyoloji laboratuvarı düzeyinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu test, cins ve türlerin tanımlanmasına varmak için uygulanması gereken test türünü yönlendirmek için esastır. İyi uygulama ve yorumlama, malzeme ve iş kurtarabilir.

Sonuç bir TSI K / K ise ve sitokrom oksidaz testi pozitifse, testlerin diğer cinsler arasında Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia gibi fermente edilmeyen Gram negatif basillerin tanımlanması için kullanılması gerektiği bilinmektedir. Negatif oksidaz ise Acinetobacter, Stenotrophomonas vb. Cinslerine yöneliktir..

Öte yandan, eğer bir TSI A / A veya K / A elde edilirse ve sitokrom oksidaz testi negatifse, nitratlar nitritlere ne kadar çok azalırsa, bunun Enterobacteriaceae Familyasına ait bir mikroorganizma olduğuna emin olacağız. Bu durumda, tanımlama yolu bu bakteri grubu için spesifik testlere yönlendirilecektir..

Öte yandan, eğer bir K / A veya A / A görüntüsü elde edilirse ve sitokrom oksidaz testi pozitifse, monte edilecek ek testler Enterobacteriaceae Familyasına ait olmayan fermente soylarının tanımlanmasına yönlendirilir, örneğin: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio ve Pasteurella.

Hidrojen sülfit, negatif oksidaz içeren bir TSI, Enterobacteriaceae familyasına ait aşağıdaki cinsin tanımlanmasına rehberlik edecektir: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella veya Salmonella.

Alkalin altı ve pozitif oksidaz içeren alkalin bevelinde az veya ılımlı hidrojen sülfit içeren bir TSI, Gram negatif, fermente edici olmayan basil üreten H'nin tanımlanması için testlerin kullanılmasına rehberlik edecektir.2S gibi Shewanella Instagram Hesabındaki Resim ve Videoları putrefaciens.

Son olarak, TSI, Gram-pozitif basillerde hidrojen sülfit üretiminin araştırılmasında, özellikle de şüphelenildiğinde kullanılabilir. Erysipelothrix rhusiopathiae.

ekili

TSI besiyeri, birincil veya seçici kültürlerde izole edilmiş, saf koloniler ile aşılanmalıdır. Koloni, karışık bitki örtüsü ile numunelerle ekilmiş olan seçici ortamdan alınmışsa, sadece yüzeye özen gösterilmelidir, çünkü koloninin alt kısmında o ortamda inhibe edilen canlı suşlar olabileceği için.

Bu nedenle, döngü asla seçici bir ortamda soğutulmamalı, sonra koloniyi almalı ve bir TSI ortamını aşılamamalıdır..

Dikim düz bir ilmek veya iğne ile yapılacaktır. Ortasının ortasından tabana ulaşana kadar geçmesine dikkat edilerek bir delik açılacaktır ve daha sonra ekim yüzeyi zikzak şeklinde aşılamak suretiyle ekim tamamlanmıştır. İki delme yapmayın.

18-24 saat boyunca aerobiyozda 37 ° C'de inkübe edin. Şu anda, ne önce ne de sonra yorumlayın.

sınırlamaları

TSI testi 18 ila 24 saat inkübasyon arasında okunmalıdır. Bu saatten önceki bir okuma, A / A fermantasyonunun yanlış bir pozitifini verebilir. Oysa bu süreden sonra yapılan bir okuma, besiyerini alkalileştiren peptonların tüketilmesinden dolayı fermente edicinin yanlış bir negatif imajına yol açabilir..

referanslar

  1. Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  4. "TSI agar." Vikipedi, özgür ansiklopedi. 10 Tem 2018, 08:09 UTC. 10 Şub 2019, 03:33 Ekleyen: en.wikipedia.org
  5. Laboratuvarlar Britania. TSI Agar (Üçlü şeker demir agarı). 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  6. BD Laboratuvarları Üçlü şeker demir ağarı (TSI Agar). 2003. Mevcut: bd.com