Agar Thayer Martin Vakfı, hazırlık ve kullanım



Thayer Martin agar İzolasyonu için oldukça besleyici ve seçici bir katı ortamdır. Neisseria meningitidis ve Neisseria gonorrhoeae; Patojenik olarak bilinen veya klinik olarak önemli Neisseria.

Thayer Martin agar'ın en önemli özelliklerinden biri, besin takviyelerinin yüksek içeriğidir. Bu özellik vazgeçilmezdir, çünkü Neisserias beslenme açısından çok talepkar olan mikroorganizmalardır ve bu nedenle ortak ortamlarda büyümezler..

Öte yandan, bu mikroorganizmalar normalde steril olmayan bölgelerde bulunduğundan, Neisseria cinsinin gelişimini etkilemeden eşlik eden floranın büyümesini engelleyen inhibitörlerin eklenmesi gerekir..

Bu agar, GC baz agar, hemoglobin, ek besin takviyeleri ve bir inhibe edici maddeler kompleksi (antibiyotikler ve antifungaller) içerir. Ticari evler eklerin her birini ayrı satmaktadır.

Bu ortamda ekilecek olan numune, aranan mikroorganizmaya bağlı olacaktır. için Neisseria gonorrhoeae İdeal örnekler vajinal ve üretral sekresyonlardır. İçin iken Neisseria meningitidis en çok kullanılan örnekler CSF, farengeal ve nazofarengeal eksüdatlardır.

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 GC baz agar
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Zenginleştirme eki
    • 1.4 İnhibitörleri
  • 2 Hazırlık
    • 2.1 Orijinal Thayer Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin değiştirildi
  • 3 kullanım
  • 4 kalite kontrol
  • 5 Sınırlamalar
  • 6 Kaynakça

vakıf

Neisserias, rahatsız edici olarak sınıflandırılan mikroorganizmalardır ve bu nedenle izolasyonları zordur. Bu nedenle, Thayer Martín karmaşık bir ortamdır ve bileşenlerinin her biri aşağıda açıklanan bir işlevi yerine getirir:

GC çekirdek ağarı

GC agar proteoz pepton, mısır nişastası, sodyum klorür, dipotasyum fosfat, monopotasyum fosfat ve agar-agar içerir. Bileşenleri, mikrobiyal gelişim için temel besinleri sağlar, toksik yağ asitlerini nötralize eder, ozmotik dengenin korunmasına katkıda bulunur, pH'ı tanımlar ve çevreye katı tutarlılık sağlar..

hemoglobin

Hemoglobin V ve X faktörlerini sağlar (sırasıyla nikotinamid adenin dinükleotidi NAD ve hemin). Bu nedenle, bu ortamda, Haemophilus türleri de büyür. Hemoglobin ticari olarak susuz formda elde edilebilir veya ortama taze defibrinlenmiş sığır kanı ilave edilebilir.

Zenginleştirme eki

Diğer taraftan, Thayer-Martin besiyerine zenginleştirme takviyesi eklenmelidir, çünkü baz agarda bulunan besinler Neisseria cinsinin gereksinimleri için yeterli değildir..

En yaygın kullanılan zenginleştirme takviyesi isovitalex olarak adlandırılır. Glutamin, adenin, NAD, kokarboksilaz, guanin, ferrik nitrat, p-amino benzoik asit, B12 vitamini, tiamin ve glikoz içerir. Bütün bu bileşikler, patojenik Neisseria'nın doğru gelişimi için gereklidir..

inhibitörler

Oldukça besleyici bir ortam olduğu için, alanın normal florasındaki mikroorganizmaların büyümesini önlemek ve böylece Neisseria cinsinin izolasyonunu desteklemek için inhibitörler kullanılmalıdır..

İnhibitör kompleksi vankomisin, kolistin ve nistatinden oluşur. Vankomisin, Gram-pozitif bakterilerin büyümesini engeller, kolistin, Pseudomonas ve bazı saprofitik Neisseria gibi Gram-negatif bakterilerin gelişimini önler ve nistatin mayalar üzerinde etkilidir. Candida albicans.

Ancak, daha sonra Thayer Martin agar değiştirildi; değişiklikler trimetoprim ilavesi, agar miktarındaki artış ve fazladan glikoz ilavesinde meydana gelmiştir. Bu değişiklikler türlerin geri kazanımını önemli ölçüde iyileştirdi Neisseria gonorrhoeae.

Trimetoprimin Proteus cinsinin büyümesini ve bununla birlikte kaynama oluşumunu engellediğine dikkat edilmelidir. Bu anlamda, antibiyotikler orta Thayer Martin'e seçici doğayı sağlayan şeydir..

hazırlık

Orijinal Thayer Martin Agar

-GC Agar

8.2 gr kurutulmuş GC ortamı tartılır ve 100 ml içinde süspanse edilir. Karıştırın ve bütünüyle eritmek için sık karıştırarak 1 dakika kaynatın. Karışımı otoklavda 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edin.

-% 2 hemoglobin

Düzgün bir karışım oluşturmak için 2 g kurutulmuş hemoglobini 2 veya 3 ml sıcak damıtılmış su içinde süspanse edin. 100 ml'lik bir hacmi tamamlamak için azar azar su ekleyin. Sterilizasyondan önce süspansiyon homojen olmalıdır.

Otoklavda 15 dakika sterilize edin.

-Zenginleştirme eki

Ticari yolu aynı ticari ev tarafından sağlanan seyreltici ile sulandırın. İyice karıştırın. Kullanılacak seyreltici miktarı kit talimatlarında belirtilecektir..

-İnhibisyon takviyesi V.C.N (vankomisin, kolistin, nistatin)

Şişeyi, ticari ev tarafından sağlanan seyreltici ile sulandırın. İyice karıştırın. Kullanılacak seyreltici miktarı kit talimatlarında belirtilecektir..

-hazır

Her 100 ml GC agar için aşağıdakileri uygulayın:

GC agar otoklavdan çıktığında, yaklaşık 50 ° C'lik bir sıcaklığa soğumaya bırakın ve hazırlanan hemoglobin solüsyonunun 2 ml'sini, 2 ml zenginleştirme takviyesinin (izobitalex veya britalex) ve 2 ml inhibisyon desteğinin ilave edin. Steril petri kaplarında karıştırın ve servis yapın.

Sertleşmesine ve kullanana kadar buzdolabında saklanmasına izin verin.

Hazırlanan besiyerinin rengi kiraz kırmızısıdır. Ortamın son pH'ı 7.2 ± 0.2'dir.

Değiştirilmiş Thayer Martin Agar

8.2 gr kurutulmuş GC ortamı tartılır ve 100 ml içinde süspanse edilir. 1 gr agar ekleyin ve 0.3 gr glukoz ekleyin. Karıştırın ve bütünüyle eritmek için sık karıştırarak 1 dakika kaynatın. Karışımı otoklavda 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edin.

Yukarıda tarif edildiği gibi hemoglobin ve zenginleştirme takviyesi hazırlayın.

Kullanılan inhibisyon takviyesi, V.C.N.T'dir (vankomisin, kolistin, nistatin, trimetoprim)..

-hazır

Orjinal Thayer Martin agarı için tarif edildiği gibi hareket edin.

kullanım

Örnekleri ekmeden önce Thayer Martin agar temperlenmelidir. Yaygın olarak kullanılan örnekler, faringeal eksüdalar, nazal eksüdalar, vajinal, üretral ve / veya rektal salgılama ve BOS'dir..

Yeni alınmış örnekler kullanın ve agar üzerinde güçlü inokül yapın. Numuneler doğrudan malzeme boşalması ile ekilir ve daha sonra yüzeyde tükenme ile sıyrılır.

Plakalar 35-37 ° C'de 24 ila 48 saat mikroaerofil kavanozda (% 5 CO) inkübe edilir2). Kuluçka süresinin sonunda, plakalar küçük, gri ve bazen de mukozit benzeri koloniler için incelenmiştir..

Şüpheli kolonilere Gram ve doğrulayıcı biyokimyasal testleri yapın.

Kalite kontrol

Thayer Martin agarının kalite kontrolünü gerçekleştirmek için aşağıdaki mikrobik suşlar kullanılabilir.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ve Neisseria meningitidis ATCC 13090; Her iki suşta da tatmin edici bir gelişme beklenmektedir.

Aşağıdaki suşlar da dahil edilmelidir: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ve Candida albicans ATCC 10231. Hepsinde bu ortamda tamamen ya da kısmi bir inhibisyon beklenir..

sınırlamaları

-Kullanılan inhibitörlere dirençli olan bakterilerin ortamda üreyebileceği unutulmamalıdır..

-Suşları vardır Neisseria gonorrhoeae kullanılan vankomisin konsantrasyonuna duyarlı olabilir. Bu nedenle, paralel olarak izovitalex ile desteklenmiş, fakat inhibitörsüz çikolata agarı kullanılması önerilir..

-Bu ortamda yetişebilen ve özellikle gonokoklar olmak üzere patojenik Neisseria'nın izolasyonuna müdahale edebilen nistatin dirençli maya türleri vardır..

referanslar

  1. Valtek teşhis laboratuvarları. Agar Thayer-Martin.2016. Mevcut: com
  2. Laboratuvarlar Britania. Thayer Martin Modifiye Orta. 2010. Erişim tarihi: britanialab.com
  3. Wikipedia katılımcıları. Thayer-Martin ağarı. Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 26 Ekim 2017, 16:33 UTC. Erişim: wikipedia.org4. Erişim tarihi: 28 Şubat 2019.
  4. Laboratuvarlar Britania. GC agar. 2010. Erişim tarihi: britanialab.com.
  5. Laboratuarlar Titiz Mikroorganizmalar için BBL ™ Orta Zenginleştirme. 1999. Erişim: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.