Agar TCBS Vakfı, hazırlık ve kullanım



TCBS agar Vibrio bakterilerinin izolasyonu ve kültürü için kullanılan, oldukça seçici ve diferansiyel bir katı kültür ortamıdır. Vibrio cholerae, V. vulnificus ve V. parahaemolyticus bu cinsin ana patojenleri olarak.

TCBS kısaltması, tiyosülfat sitrat safra sukrozu anlamına gelir. Bu agar ayrıca Vibrios için seçici ortam olarak da bilinir. Orijinal formül Nakanishi tarafından oluşturuldu ve daha sonra Kobayashi tarafından değiştirildi..

Maya ekstresi, et peptonu, triptein, sodyum sitrat, sodyum tiyosülfat, öküz safrası, sukroz, sodyum klorür, ferrik sitrat, bromotimol mavisi, timol mavisi ve agardan oluşur..

Bu bileşim su, dışkı ve gıda örneklerinden Vibrio türlerinin yeterli bir şekilde gelişmesini sağlar; hariç Vibrio hollisae, Bu, bu ortamda büyümez. Ek olarak, TCBS ortamı, diğer eşlik eden bakterilerin, özellikle koliformların büyümesini inhibe edebilir.

Vibrio cinsinin bazı türlerinin ürettiği şiddetli gastrointestinal ve ekstra bağırsak problemleri nedeniyle teşhisi çok önemlidir. İnsan temel olarak çiğ veya az pişmiş deniz ürünleri veya kirli su tüketimi ile ve aynı zamanda yaraların enfeksiyonu ile enfekte olur.

Bu nedenle, klinik laboratuvarlar, özellikle pirinç suyunun ortaya çıkmasıyla, sıvı dışkı örneklerinin dışkı kültürlerinin çalışmasında TCBS agar içermelidir. Özellikle hasta deniz suyu ile temas halinde olduğunu ya da deniz ürünleri ya da balık tükettiğini bildirirse.

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 Hazırlık
  • 3 kullanım
  • 4 Tohumlu
  • 5 Sınırlama
  • 6 kalite kontrol
  • 7 Kaynakça

vakıf

Maya ekstresi, et peptonları ve triptein bu besiyerinin besleyici kaynağıdır. Bununla birlikte, TCBS agar çoğu bakteri için kaçınılmaz bir ortamdır.

Yüksek seçiciliği, sodyum sitrat ve öküz safrası ilavesiyle verilir; her ikisi de, ortama bir alkalin pH sağlayan, eşlik eden floranın büyümesini sınırlayan ve V. cholerae, diğer türler arasında. Bu not edilmelidir Vibrio cholerae mide ekşimesine çok duyarlıdır.

Sodyum klorür, parçası için, ozmotik olarak ortama dengeler. Ek olarak, konsantrasyonu yüksek olduğu için, aynı zamanda, halofilik bakterilerin büyümesini destekleyen bir engelleyici madde olarak da işlev görür..

Sükroz, bromotimol ve timol mavisinin mavi pH göstergeleri ile birlikte ortama diferansiyel karakter kazandıran mayalanabilir şekerdir. Bu nedenle, bu yolla sakaroz fermente türlerini fermente edilmeyen türlerden ayırmak mümkündür.

Sükroz fermentasyon suşlarının kolonileri sarı bir renk geliştirir ve asit üretimi nedeniyle ortamı yeşilden sarıya dönüştürür. Fermente olmayan maddeler yarı saydam hale gelir ve besiyeri orijinal renk olarak kalır (yeşil).

Benzer şekilde, bu besiyeri, açığa çıkaran bir madde olarak bir kükürt ve ferrik sitrat kaynağı olarak sodyum tiyosülfat içerir. Her ikisi de hidrojen sülfit (renksiz gaz) üretebilen bakterileri göstermektedir. H2S, tiyosülfattan oluşur ve daha sonra ferrik sitrat ile reaksiyona girdiğinde görünür bir siyah çökelti oluşur.

Son olarak, agar ortama katı bir tutarlılık veren şeydir.

hazırlık

Susuz ortamın 89 gramını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde eritin. Isıtma ve sık çalkalama yoluyla çözünmeye yardımcı olun. Karışım 2 dakika kaynatılabilir.

Bu ortam otoklavlamıyor. Çözündükten sonra doğrudan steril plakalar üzerinde servis edilir. Katılaşırken, plaka yapıcılarda ters bir şekilde düzenlenirler ve kullanılana kadar buzdolabında (2-8 ° C) saklanırlar..

Hazırlama sonrası ortam pH 8.6 ± 0.2'de olmalıdır.

Susuz ortamın rengi açık bej veya yeşilimsi-bej, ortamın rengi orman yeşili veya mavimsi yeşildir.

Örnekleri ekmeden önce plakaları temperleme yapmak önemlidir.

kullanım

Vibrios'un izolasyonu için en yaygın örnek ishal dışkılarıdır..

Seçici ortamda derhal ekilemedikleri takdirde dışkı örnekleri Cary Blair'in ortasında taşınmalıdır..

Kültürün duyarlılığını arttırmak için dışkı, maksimum 8 saat boyunca zenginleştirme ortamı olarak pH 8.4'te peptonlu sudan geçirilebilir, oradan TCBS ortamına alt kültürlenir..

Ayrıca bazı Vibrios suşlarının immün sistemi baskılanmış hastalarda septisemiye neden olabileceği, dolayısıyla kan kültürlerinden izole edilebilecekleri akılda tutulmalıdır. Aynı şekilde, sudan ve denizden alınan gıdalardan örnekler, kolera hastalığının salgın salgınları olduğunda analiz edilebilir..

ekili

Çalışılan örneğin inokülumu öne çıkmalı, tohumlama işlemi bitirme yöntemiyle yapılır. Plakalar, 37 ° C'de 24 saat boyunca aerobiyozda inkübe edilir..

Varsayımsal kolonileri Vibrio cholerae Sükrozu mayaladıkları için orta boy, düzgün, opak, ince kenarlı ve sarı renktedirler..

Benzer şekilde, türlerin V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ve bazı V. vulnificus. Vibrios'un diğer türleri klinik olarak önemli V. parahaemolyticus sakarozu mayalamayın, zeytin yeşili koloniler olarak gelişir.

Öte yandan, oksidaz (+) bazı Aeromonas ve Plesiomonas türlerinin klinisyenin kafasını karıştırabilecek sarı koloniler geliştirerek bu ortamda büyüyebileceğini unutmamalıyız. Bazı Pseudomonas türleri de oksidaz (+) yeşil koloniler kadar büyür. V. parahaemolyticus.

sınırlama

Vibrio cinsi için pozitif olan oksidaz testi hiçbir zaman TCBS agar'dan elde edilen kolonilerden yapılmamalıdır, çünkü elde edilen sonuç yanlış bir negatif olacaktır. Ortamdaki bileşikler bu testte güçlü şekilde etkileşime girer. Bu nedenle kan agarı üzerindeki alt kültürlerden yapılmalıdır..

Kalite kontrol

Ortamın iyi durumda olduğunu kanıtlamak için bilinen veya sertifikalı kontrol suşlarının eklenmesi ve büyümenin beklenen özellikleri karşılayıp karşılamadığını gözlemlemek önerilir..

Bunun için, suşları:

-Vibrio cholerae - Tatmin edici büyüme (sarı koloniler, yarı saydam sınır).

-Vibrio parahaemolyticus - Tatmin edici büyüme (yeşil merkez ve yarı saydam kenarlıklı koloni).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tatmin edici büyüme (koloninin çevresinde aynı renkteki halelere sahip sarı koloniler).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - toplam veya kısmi inhibisyon (küçük sarı veya yarı saydam koloniler).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - kısmi veya toplam inhibisyon (mavi koloniler).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Tamamen engellendi.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Toplam veya kısmi inhibisyon. (Küçük koloniler ortada saydam yeşil kenar).

İnoküle edilmemiş bir besiyerinin kuluçka değişikliği olmamalıdır.

referanslar

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. TCBS agar. 2009. Şurada mevcuttur: f-soria.es
  2. BD Laboratuvarı. BD. TCBS Agar 2003. Tarihinde mevcuttur: bd.com
  3. Laboratuvarlar Britania. TCBS Orta. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratuvarları TCBS Agar. 2016. Mevcut adres: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.