Soy agar tripticaseína vakfı, hazırlanması ve kullanımı



triptikazin soya agarı veya triptikaz soya agarı katı, seçici olmayan ve besleyici bir kültür ortamıdır. İngilizce Trypticase Soy Agar'daki kısaltması için TSA harfleriyle belirtilmiştir. Triptein, soya peptonu, sodyum klorür ve agar-agardan oluşur.

Besin gücü yüksek olduğundan, orta derecede zorlu ve zorlu olmayan mikroorganizmaların yetiştirilmesi için idealdir. Ek takviyeler içermeyen besiyeri birincil kültürler için önerilmez, ancak saf suşların alt kültürlenmesi ve diğer kullanımların yanı sıra canlı kalması için çok faydalıdır.

Ayrıca, bu agar kan agarı gibi zenginleştirilmiş ortamların hazırlanmasında, özellikle hemoliz kalıplarını gözlemlemek ve tanı konmasında gerekli olan optokin ve bacitrasinin taksonlarını monte etmek için gerektiğinde temel teşkil eder. Streptococcus pneumoniae ve Streptococcus pyogenes sırasıyla.

Öte yandan, antibiyotiklerle birleştiğinde, karma florası olan örneklerden klinik öneme sahip fakültatif ve katı anaerobik mikroorganizmaları izole etmek faydalıdır..

Son olarak, triptikazin soya agarının bileşimi ve performansı, farklı farmakopeler (Avrupa, Japon ve Kuzey Amerika) tarafından belirlenen gereklilikleri karşılar..

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 Hazırlık
    • 2.1 Tripticasein soya agar plakları
    • 2.2 Kanla takviye edilmiş Triptikazin soya agar plakları
    • 2.3 Isıtılmış kanla desteklenmiş triptikazin soya agar plakları
    • 2.4 Triptikazin soya agarının dilimleri
  • 3 Kullanım
  • 4 Tohumlu
  • 5 kalite kontrol
    • 5.1 Sterilite kontrolü
    • 5.2 Büyüme kontrolü
    • 5.3 Kanla takviye edilmiş triptikazin soya agarının hemolizinin büyüme ve desen kontrolü
  • 6 Kaynakça

vakıf

Bakterilerin doğru gelişmesi için, amino asitler, vitaminler, pürin bazları ve pirimidik gibi enerji katkılarının varlığı gereklidir..

Bu anlamda, triptein ve soya peptonu bu besin maddelerini mikroorganizmalara sağlar, böylece tam gelişimine izin verir. Bununla birlikte, zorlu bakteriler için, zenginleşmesini arttırmak için bu agarı defibrinli kan veya ısıtılmış kanla takviye etmek gerekir..

Öte yandan, ortama antibiyotik eklenirse, seçici bir ortam haline gelir. Ayrıca sistin tellürit eklerken, Listeria cinsinin türlerinin izolasyonunu desteklemek için% 0.6 maya özü de ekleyebilirsiniz. ve Kuzu kanı için idealdir Corynebacterium diphteriae.

Son olarak, sodyum klorür ortama ozmotik dengeyi verir ve agar katı tutarlılığı sağlar.

hazırlık

Triptikazin soya agar plakları

Triptikazin soya agarının hazırlanması için, 40 gram kurutulmuş ticari ortam dijital bir ölçekte tartılmalıdır. Fiola içinde bulunan bir litre damıtılmış su içinde çözülür.

Karışım 5 dakika bekletilir ve daha sonra besiyerinin çözünmesine yardımcı olmak için bir ısı kaynağına getirilir. Sık sık karıştırılmalı ve 1 veya 2 dakika kaynatmaya bırakılmalıdır. Daha sonra, ortam otoklavda 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edilir.

50 ° C'ye soğumaya bırakın ve steril Petri kaplarına dağıtın. Katılaştırın, ters çevirin, plaklara sipariş verin ve buzdolabında saklayın.

Ortamın nihai pH değeri 7.3 ± 0.2 olmalıdır.

Susuzlaştırılmış kültür besiyerinin renginin açık bej olduğu ve kuru bir yerde 10 ila 35 ° C arasında saklanması gerektiği dikkate alınmalıdır..

Onun için hazırlanan agar açık sarı renktedir. Hazırlanan plakalar, kullanılana kadar buzdolabında (2 - 8 ° C) saklanmalıdır..

Plakalar kullanılmadan önce oda sıcaklığına ulaşmalıdır.

Kanla takviye edilmiş triptikazin soya agar plakları

Kan agarı, 50 ° C'de trypticasein soya agarının soğutulması sırasında% 5 defibrinlenmiş kan eklenerek hazırlanır. Karışım hafif hareketlerle döndürülerek homojenleştirilir.

Steril petri tabaklarında servis yapın. Ortamın rengi kiraz kırmızısı olmalıdır.

Isıtılmış kanla takviye edilmiş triptikazin soya agar plakaları

TSA bazlı kan agarı hazırlamak için yukarıda açıklanan prosedürler aynıdır, ancak otoklavdan çıkarken ortamın sıcaklığı yaklaşık olarak 56 ila 70 ° C arasında olana kadar beklemesine izin verilir. O zaman kan yerleştirilir ve ortam kahverengileşinceye kadar karıştırılır.

Steril petri tabaklarında servis yapın. Besiyerinin rengi çikolata kahverengidir.

Tripticaseine soya agarının dilimleri

Agar hazırlama prosedürü, plakalar için tarif edilen prosedürün aynısıdır, ancak Petri kaplarında besiyerine servis yapmak yerine, sterilize etmeden önce Bakalit kapaklı tüplere 10 ila 12 ml arasında dağıtılması farklıdır..

Daha sonra, tüpler 121 ° C'de 15 dakika boyunca otoklavlanır. Giderken, bir destek yardımı ile eğilirler ve kendilerini katılaştırmalarına izin verirler..

Hazırlanan takozlar yüzeye ekilir ve belirli bir süre boyunca talep edilmeyen uygulanabilir mikroorganizmaların korunmasına hizmet eder.

uygulamaları

Trypticasein soya agarı aşağıdaki durumlarda kullanılır:

-Çoğu laboratuvarda rutin olarak kullanılan klasik kan agarını hazırlamak için bir baz olarak.

-Zorlu bakteri izolasyonu.

-Hemoliz paterninin gözlemlenmesi.

-Diyagnostik testlerin yürütülmesi.

-İçin özel kan agarı hazırlamak için bir temel olarak Corynebacterium diphteriae, tellür sistinli ve kuzu kanı.

-Kuzu kanı agarı hazırlamak için bir temel olarak, özellikle anaerobların büyümesi için daha fazla kanamisin-vankomisin Bacteroides sp.

-Zorlu olmayan suşların bakımı için (Bacterioteca).

-Su, çevre, gıda ve kozmetik numunelerin mikrobiyal limit çalışmasında mikrobiyal aerobik sayım.

ekili

Numuneler doğrudan kan veya başka katkı maddeleri ile takviye edilmiş triptikazin soya agarının yüzeyine ekilebilir. Tükenme ile ekilir.

Oysa, katkı maddesi içermeyen triptikazin soya agar plakaları, genellikle mikrobiyal soyları alt etmek için kullanılır (bakteri veya maya).

Kalite kontrol

Sterilite kontrolü

Triptikazin soya agarı ile hazırlanan farklı ortamların sterilitesini kontrol etmek için, aşağıdakilerin yapılması önerilir: hazırlanan her partiden, bir veya iki plaka veya tüp, steriliteyi göstermek için 37 ° C'de inokülasyon olmadan 24 saat inkübe edilmelidir. Her durumda, büyüme olmadan kalmalıdır.

Kirlenme bulunursa, tüm parti atılmalıdır.

Büyüme kontrolü

Triptikazin soya agarının düzgün işleyişini incelemek için, aşağıdaki bakteri suşları kullanılabilir: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ve Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Suşlar ekilir ve aerobiyozda 37 ° C'de 24 saat inkübe edilir.

Her durumda, büyüme tatmin edici olmalıdır.

Mantarları Kompleks olarak da kullanabilirsiniz. Candida albicans ATCC 10231 ve Aspergillus niger ATCC 16404. Her iki suş için iyi bir büyüme beklenmektedir..

Kanla takviye edilmiş triptikazin soya agarının büyüme kontrolü ve hemoliz paterni

Bu bazla hazırlanan kanlı agarın düzgün çalıştığını doğrulamak için aşağıdaki suşlar kullanılabilir: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ve Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Ekilir ve 37 ° C'de 24 saat boyunca mikroaerofilikte inkübe edilir..

Her durumda, büyüme göz önünde bulundurularak S. pyogenes beta-hemoliz (koloninin etrafındaki berrak halo) ve her iki suşunda S. pneumoniae Alfa hemoliz (kolonilerin etrafındaki yeşilimsi halo) gözlenmelidir..

referanslar

  1. Wikipedia katılımcıları. Trypticase Ben ağarım. Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 17 Aralık 2018, 15:47 UTC. Erişim: https://en.wikipedia.org
  2. Laboratuvarlar Britania. Tryteine ​​soya agarı. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  3. Neogen Laboratuvarları Soya fasulyesi triptik. Erişim: foodsafety.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden.
  5. BD Laboratuvarları Trypticase Ben Agar. 2014. Mevcut adres: .bd.com