Agar kan temeli, kullanımları ve hazırlanması

kanlı agar zenginleştirilmiş bir katı ortamdır, diferansiyeldir ancak seçici değildir. Klinik örneklerden veya alt kültürlerden çok çeşitli mikroorganizmaların geri kazanımı ve büyümesi için kullanılır..

Laboratuvarda alınan çoğu klinik örneğin tohumlanmasında klasik kan agarı kullanılmalıdır; Faydalı olmadığı dışkı örnekleri hariç, belirli değişikliklerle hazırlanmadan.

Bu kültür ortamı temel olarak zenginleştirilmiş bir baz agar ve% 5 kandan oluşur. Agarın temeli ihtiyaca göre değişebilir, ancak esas olarak diğerleri arasında peptonlar, amino asitler, vitaminler, et özü, sodyum klorür, agardan oluşacaktır..

Kan gelince, genellikle koyun, tavşan veya at gibi hayvanlardan kan elde etmek için bir bioterium ile temasa geçmek gerekir. Ancak, bu her zaman mümkün değildir ve bazen insan kanı kullanılır.

Kan agar besiyeri laboratuarda hazırlanabilir veya kendisine özel şirketler için hazır olarak satın alınabilir. Bu besiyerinin hazırlanması en hassas ürünlerden biridir, hazırlanmasındaki herhangi bir dikkatsizlik kontamine bir partiye neden olacaktır..

Bu nedenle tüm olası önlemler alınmalı ve sonunda hazırlanan her 100 için 37 ° C 1 plakasında kuluçkada kalite kontrol yapılmalıdır..

indeks

• 1 Vakfı
• 2 kullanır
  • 2.1 Kan grubu seçimi
  • 2.2 Baz agar tipi seçimi
  • 2.3 Hazırlanması için kullanılan baz besiyerine göre kanlı agarın kullanımı
• 3 Hazırlık
  • 3.1 Tart ve çöz
  • 3.2 Sterilize etmek
  • 3.3 Kanın toplanması
  • 3.4 Petri kabına dökün
• 4 Kaynakça

vakıf

Kan agarının zenginleştirilmiş, diferansiyel ve seçici olmayan bir ortam olma özelliğine sahip olduğu zaten belirtilmiştir. Bu özelliklerin her birinin temeli aşağıda açıklanmıştır..

Kanlı agar zenginleştirilmiş bir ortamdır, çünkü agar bazında% 5 ila% 10 ana kan katkı maddesidir. Her iki bileşik de birçok besin içerir ve bu özellik, ekilebilir bakterilerin çoğunun içinde üremesine izin verir..

Bu büyüme kısıtlama olmadan gerçekleşir; bu nedenle seçici değildir. Bununla birlikte, bazı mikroorganizmaların büyümesini önleyen ve başkalarının büyümesini destekleyen bu ortama bileşikler ilave edilirse, seçici hale gelir. Bazı antibiyotik türleri veya antifungaller eklenirse durum budur.

Aynı şekilde, kan agarı diferansiyel bir ortamdır, çünkü 3 tip bakteri ayırt etmeyi sağlar: beta-hemolitik, alfa-hemolitik ve gama hemolitik..

Beta-hemolitikler, kırmızı kan hücrelerini parçalayabilen veya tamamen kırabilen, koloniler etrafında açık bir halo oluşturan, böylece ß veya β hemoliz - hemoliz üreten ve isms-hemolitik olarak adlandırılan mikroorganizmalardır..

Ss-hemolitik bakteri örnekleri Streptococcus pyogenes ve Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolitikler, hemoglobinin, methemoglobine oksitlendiği ve koloniler çevresinde yeşilimsi bir renklenme meydana getiren kısmi bir hemoliz yapanlardır. Bu fenomen hemoliz α veya α-hemoliz olarak bilinir ve bakteriler α-hemolitik olarak sınıflandırılır.

Α-hemolitik bakteri örneği Streptococcus pneumoniae ve streptokok grubun viridans.

Son olarak, gama-hemolitik veya hemolitik olmayan bakteriler vardır. Bunlar üzerinde değişiklik yapmadan agar üzerinde büyür,,-hemoliz olarak bilinen bir etki ve mikroorganizmalar γ-hemolitiktir.

Γ-hemolitik bakteri örneği: D grubu Streptococcus'un bazı türleri (Streptococcus bovis ve Enterococcus faecalis).

uygulamaları

Kan agar kültür ortamı mikrobiyoloji laboratuarında en yaygın kullanılanlardan biridir.

Kan agar besiyerinde üreyebilen mikroorganizmalar arasında: katı, fakültatif, mikroaerofilik, anaerobik, Gram pozitif veya Gram negatif aerobik bakteriler, hızlı büyüyen veya yavaş büyüyen bakteriler bulunur..

Mantar ve mayaların yanı sıra, besin açısından zorlayıcı veya rahatsız edici bazı bakteriler de büyür. Aynı şekilde, metabolik olarak çok zayıf olan suşları alt kültürlemek veya yeniden etkinleştirmek faydalıdır..

Bununla birlikte, kan grubu ve baz agar seçimi, geri kazanıldığından şüphelenilen muhtemel mikroorganizmaya ve plaktan yapılacak kullanıma (kültür veya antibiyogram) bağlı olarak değişecektir..

Kan grubu seçimi

Kan kuzu, tavşan, at veya insan olabilir.

En çok tavsiye edilen, bazı istisnalar dışında kuzu kanıdır. Örneğin, önerilen kanın at veya tavşan olduğu Haemophilus türlerini izole etmek, kuzu kanında faktör V'yi engelleyen enzimler bulunduğundan,.

En az önerilen insandır, ancak en çok kullanılanıdır, çünkü belki de elde edilmesi en kolay olanıdır.. 

Kan, herhangi bir katkı maddesi olmadan ve sağlıklı hayvanlardan elde edilen defibrinlenmiş olmalıdır. İnsan kanının kullanımı için, akılda bulundurulması gereken birkaç faktör vardır:

Kan, bakteri enfeksiyonu geçirmiş bireylerden geliyorsa, spesifik antikorları olacaktır. Bu şartlar altında, bazı bakterilerin üremesi engellenebilir.

Kan bankasından elde edilirse sitrat içerir ve bazı bakterilerin varlığında gelişmemesi mümkündür. Öte yandan, kan antibiyotik alan hastalardan geliyorsa, duyarlı bakteri üremesi engellenebilir.

Kan diyabetik bir kişiden geliyorsa, aşırı glukoz hemoliz şekillerinin düzgün bir şekilde gelişmesine engel olur..

Baz agar tipi seçimi

Kanlı agarın hazırlanmasında kullanılan baz agar çok geniş olabilir. Bunlardan bazıları: besinsel agar, beyin kalp infüzyon agarı, triptikaz soya agarı, Müeller Hinton agarı, Thayer Martin agarı, Columbia agarı, Brucella agarı, Campylobacter agarı, vs..

Hazırlanması için kullanılan baz besiyerine göre kanlı agarın kullanımı

Besin agarı

Bu baz en az kullanılandır, çünkü üzerinde enterik basil gibi temel olarak talep edilmeyen bakteriler gelişir., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, diğerleri arasında. Streptococcus'u izole etmek önerilmez..

Kalp Beyin İnfüzyon Agarı (BHI)

Kan agarının temeli olarak en çok kullanılanlardan biridir, çünkü çoğu bakteri büyümesi için gerekli besinleri içerir. Streptococcus sp ve diğer zorlu bakteriler. Her ne kadar hemoliz şekillerini gözlemlemek uygun olmamakla birlikte.

Kuzu kanı genellikle bu bazla birlikte kullanılır..

Bazı agorganizmaları izole etmek için başka bileşiklerin ilave edildiği kan agar varyantları da hazırlanabilir. Örneğin, tavşan kanı, sistin ve glikoz ile desteklenmiş beyin kalp infüzyon agarı izole edilmeye yarar Francisella tularensis.

Oysaki, sistin tellurit ile izolasyonu için yararlıdır Corynebacterium diphteriae. İnsan ya da kuzu kanı kullanabilirsiniz.

İlki ile beta-hemoliz dar bir halo gibi görünürken, ikincisi ile halo çok daha geniş olacaktır.

Aynı şekilde, bu baz, bacitracin, mısır nişastası, at kanı ve diğer zenginleştirme takviyeleri (IsoVitaleX) ile birlikte, cinsin izolasyonu için kullanılır. Haemophilus sp solunum örneklerinden.

Ayrıca, antibiyotik kloramfenikol - gentamisin veya penisilin - streptomisin kombinasyonunu at kanıyla eklerseniz, Sabouraud glikoz agardan daha yüksek verimle bile, zorlu patojenik mantarların izolasyonu için idealdir. Özellikle izolasyonunda yararlıdır Histoplazma capsulatum.

Tryptive soya fasulyesi

Bu baz, hemoliz paterninin daha iyi gözlenmesi ve optokin ve bacitracin taksonları gibi tanı testlerinin yapılması için en çok tavsiye edilen bazdır. Rutin olarak kullanılan klasik kan agarıdır..

Bu baz ile ayrıca özel kan agarını hazırlayabilirsiniz. Corynebacterium diphteriae, tellür sistinli ve kuzu kanı.

Aynı şekilde, bu agarın kuzu kanı ve kanamisin-vankomisin ile kombinasyonu, özellikle anaerobların büyümesi için idealdir. Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Kanla takviye edilmiş bu baz, örneğin, zorlu mikroorganizmaların antibiyogramını yapmak için kullanılır. Streptococcus sp.

Bu gibi bakteri izolasyonu için de yararlıdır Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Bu besiyeri Neisseria cinsinden şüphelenildiğinde özellikle kan agarı için bir baz olarak idealdir. Neisseria meningitidis, olarak N. gonorrhoeae kan agarı üzerinde büyümez.

Ayrıca, duyarlılık testlerinin yapılmasına da hizmet eder. Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Bu baz arayışı içinde mide biyopsisi örnekleri tohumlama için mükemmel Helicobacter pylori.

Ortam, mevcut olabilecek diğer bakteri türlerinin büyümesini sınırlandırmak için antibiyotiklerle (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B ve sefsulodin) defibrinlenmiş% 7 kuzu kanı eklenerek hazırlanır..

İnsan veya kuzu kanı, nalidiksik asit ve kolistin ile takviye edilmiş bu aynı baz izole etmek için yararlıdır Gardnerella vaginalis. Aynı mikroorganizmanın antibiyotiklerine karşı antimikrobiyal duyarlılığı değerlendirmek için de idealdir..

Ek olarak, anaerobların yetiştirilmesinde kan agarının hazırlanmasında, aminoglikozidlerin ve vankomisin eklenmesinde kullanılır..

Bu baz hemoliz kalıplarını doğru şekilde gözlemlememize izin verir.

Brucella Agar

K vitamini ilavesi ile birlikte kanlı agarın temeli olarak kullanılan bu ortam, anaerobik bakteri yetiştiriciliği için idealdir. Bu durumda kuzu kanının kullanılması önerilir..

Campylobacter agar

% 5 koyun kanı ve 5 antibiyotik (sefalotin, amfoterisin B, trimetoprim, polimiksin B ve vankomisin) ile takviye edilmiş Campylobacter Agar, izole etmek için kullanılan ortamdır Campylobacter jejuni dışkı örneklerinde.

hazırlık

Her ticari ev, bir litre kültür ortamı hazırlama talimatlarını paketin arkasına getirir. Seçilen baz ağara göre istenen miktarı hazırlamak için karşılık gelen hesaplamalar yapılabilir..

Tartılır ve çözülür

Baz agar susuz kalır (toz), bu nedenle pH 7.3'e ayarlanmış damıtılmış su içinde çözülmelidir..

Seçilen baz agar ile belirtilen miktar bir fiola içinde karşılık gelen su miktarında tartılır ve çözülür, daha sonra orta dereceli bir ısıya ısıtılır ve tüm toz çözünene kadar dönen hareketlerle karıştırılır..

sterilize etmek

Çözündükten sonra, 20 dakika boyunca 121 ° C'de bir otoklavda sterilize edin.

Kan birikimi

Otoklavdan ayrılırken, sıcaklık 40 ila 50 ° C arasında salınana kadar fiolaların soğumasını bekleyin; insan derisinin desteklediği bir sıcaklıktır ve aynı zamanda agar henüz katılaşmamıştır..

Bunun için, fiolalara elle dokunulur ve ısı tolere edilebilirse, karşılık gelen miktarda defibrinli kan (agar litresi başına 50 ml) ilave etmek için ideal sıcaklıktır. Homojenize etmek için hafifçe karıştırın.

Kanın agreganının geçişi çok önemlidir, çünkü ortam çok sıcak olduğunda yapılırsa kırmızı kan hücreleri kırılır ve ortam hemoliz gözlemlemek için hizmet etmez.

Çok soğuk ilave edilirse, topaklar oluşacak ve besi yeri uygun hale getirmek için besiyerinin yüzeyi pürüzsüz olmayacaktır.

Petri kaplarına dökün

Kanı homojenleştirdikten hemen sonra steril petri kaplarında servis yapın. Her bir Petri kabına yaklaşık 20 ml dökülür. Bu prosedür bir laminer akış kaputunda veya yakıcının yakınında gerçekleştirilir.

Petri kabındaki kan agarı servis ederken, plakanın yüzeyinde hava kabarcığı kalmamalıdır. Bu durumda, Bunsen brülörünün alevi onları yok etmek için plakanın üzerinden hızla geçer..

Plakaların katılaşmasına ve kullanılana kadar ters çevrilmiş bir buzdolabında (2-8 ° C) saklanmasına izin verilir. Kan agar plakalarını kullanmadan önce ekilmek için temperlenmelidir (oda sıcaklığına gelmelerini sağlayın).

Hazırlanan plakalar yaklaşık 1 hafta dayanır.

referanslar

1. Bayona M. Yetiştiriciliği için mikrobiyolojik koşullar Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Servisi.
3. "Agar kanı" Vikipedi, özgür ansiklopedi. 10 Aralık 2018, 14:55 UTC. 27 Aralık 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden.
5. CEDIVET Laboratuvarı Veteriner Teşhis Merkezi. Guatemala. Erişim: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı (5. basım). Arjantin, Editör Panamericana S.A..