Ağar Sabouraud vakfı, hazırlanması ve kullanımı

Sabouraud agar, Ayrıca Sabouraud dekstroz agar olarak da bilinir, maya, küf ve dermatofit gibi mantarların izolasyonu ve gelişimi için zenginleştirilmiş katı bir kültür besiyeridir..

Bu nedenle, bu yöntem, klinik veya klinik olmayan örneklerden patojenik veya fırsatçı mantarların varlığını araştırmak için bir mikrobiyoloji laboratuvarında bulunamaz. Aynı şekilde, Streptomyces ve Nocardia gibi filamentli bakterilerin büyümesi için de idealdir. Kullanımı çok geniştir, insan, hayvan, bitki ve endüstriyel mikolojide kullanılabilir.

Bu ortam, 1896'da, özellikle dermatofitlerin neden olduğu kafa derisi hastalıklarında dünyaca ünlü bir uzman olan ünlü dermatolog Raimond Sabouraud tarafından yaratılmıştır..

Yaratılması o kadar önemliydi ki, o zamandan beri kullanılmış ve günümüzde bazı değişikliklere rağmen devam ediyor.

Mantarlar için özel olmasına rağmen, bu ortamda bakteri üreyebilir, bu nedenle karma florası olan numuneler için antibiyotiklerin hazırlanmasına dahil edilmeleri gerekir ve bu nedenle mevcut olabilecek bakteri florasının büyümesini engeller.

Antibiyotik seçimi, bazı maddelerin varlığında inhibe edildiğinden, kurtarmak istediğiniz mantar tipi dikkate alınarak özenle yapılmalıdır..

indeks

• 1 Vakfı
  • 1.1 Sabouraud dekstroz agarın antibiyotiklerle en çok kullanılan kombinasyonları
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Dekstroz Sabouraud Agar 
  • 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (Emmonların Modifikasyonu)
  • 2.3 Sabouraud dekstroz agarı (Emmons modifikasyonu) kloramfenikol ile
  • 2.4 Dextrose Sabouraud Sikloheksimid içeren Emmons agarı
  • 2.5 Kloramfenikol ve sikloheksimid ile Dekstroz Sabouraud Agar (Emmons)
  • 2.6 Eklenebilecek diğer antibiyotikler
• 3 Özel hususlar
• 4 kalite kontrol
• 5 kullanır
  • 5.1 Birincil ekim
  • 5.2 Sporülasyon
  • 5.3 Koruma
  • 5.4 Mikrokültürler
  • 5.5 İnsan mikolojisinde
  • 5.6 Hayvan mikolojisi
  • 5.7 Çevresel mikoloji
  • 5.8 Endüstriyel mikoloji
  • 5.9 Bitki mikolojisi
• 6 Kaynakça

vakıf

Sabouraud dekstroz agar, orijinal formülasyonunda, 5.6 ± 0.2'lik asidik pH değerinden dolayı zayıf selektiftir, ancak çoğunlukla uzun süreli inkübasyonlarda bakteri gelişebilir.

Ortam, mikroorganizmaların gelişimi için karbon ve azot kaynağını sağlayan kazein pepton ve pankreas sindirilmiş hayvan dokusu içerir.

Ayrıca, mantarların bakteri üzerindeki büyümesini destekleyen, enerji kaynağı olarak işlev gören yüksek miktarda glikoz içermektedir. Hepsi doğru tutarlılığı sağlayan bir bileşen olan agar-agar ile karıştırılmıştır..

Öte yandan, antibiyotik eklendiğinde Sabouraud dekstroz agar seçici olabilir.

Antibiyotiklerde özellikle yara örneklerinde, açık ülserlerde veya büyük bakteriyel kontaminasyondan şüphelenilen herhangi bir örnekte faydalıdır..

Sabouraud dekstroz agarın antibiyotiklerle birlikte en çok kullanılanları

-Kloramfenikol içeren Sabouraud agar: mayaların ve filamentli mantarların geri kazanılması için ideal.

-Gentamisin ve kloramfenikol içeren Sabouraud agar: bu besiyerinde hemen hemen tüm filamentli mantarları ve mayaları çoğaltır ve Enterobacteria, Pseudomonas ve Staphylococcus dahil çok sayıda bakteri inhibe eder.

-Sikloheksimidli Sabouraud agar: Şüphe dimorfik mantarlar olduğu sürece, özellikle deriden veya solunum yolundan alınan örnekler için faydalıdır..

Sikloheksimid dikkatli kullanılmalıdır; Patojenik olmayan veya çevresel mantarların ve bir numunede kirletici madde olarak bulunabilecek mayaların büyümesini engellemek için kullanılmasına rağmen, aynı zamanda bazı mantarların büyümesini de engeller. Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ve diğer fırsatçı mantarlar.

-Kloramfenikol artı sikloheksimit içeren Sabouraud agar: esas olarak dimorfik dermatofitleri ve mantarları izole etmek için kullanılır. Bazı fırsatçı mantar türlerini inhibe etmesi dezavantajına sahiptir; Candida albicans yok, Aspergillus, Zygomycetes veya C. neoformans.

-Kloramfenikol, streptomisin, penisilin G ve sikloheksimid içeren Sabouraud agar: bakteri ve saprofit mantarları ile aşırı derecede kirlenmiş numuneler için idealdir, ancak bunların büyümesini engelleyen dezavantajı vardır Aktinomiler ve Nocardias, yukarıda belirtilen fırsatçı mantarlara ek olarak.

hazırlık

İçeriğe ayrı ayrı sahipseniz, aşağıdaki şekilde hazırlayabilirsiniz:

Dekstroz agar Sabouraud 

pişmanlık:

- 40 gr dekstroz

- 10 g pepton

- 15 gr ağar-ağar

- 1000 ml distile su ölçün

Tüm bileşenler karıştırılır, pH 5.6'ya ayarlanır. Çözeltileri kaynatarak çözün, 20 ml ortamın 25 x 150 mm'lik tüplere, flanşsız ve tercihen pamuklu üst kısımlara dağıtın.

Kullanılabilirliğine bağlı olarak diğer tüp boyutları da kullanılabilir.

Basınçlı atmosferde (121 ° C) 10 dakika boyunca otoklavlanırlar. Otoklavlama süresini geçmeyin. Otoklavdan ayrılırken, tüpler bir oluk zirvesinde katılaşana kadar bir destekle eğilir..

Diğer bir yol ise malzemeleri kaynayana kadar ısıtmaktır. Aynı otoklav içinde 10 dakika boyunca fiola ve ardından 20 ml Petri kaplarına dağıtın.

Zaten tüm malzemeleri içeren bir Sabouraud dekstroz agar ortamı mevcutsa, ticari ev tarafından bir litre su için belirtilen miktarı tartıyoruz. Adımların geri kalanı yukarıda açıklananlarla aynıdır..

Dekstroz agar Sabouraud (Emmons tadilatı)

pişmanlık:

-  20 gr dekstroz

- 10 g pepton

-  17 gr ağar-ağar

-  1000 ml distile su ölçün

Tüm içerikler karıştırılır, pH 6,9'a ayarlanır. Önceki durumda olduğu gibi devam edin.

Tüm malzemelerle besiyeri sunan ticari evler var. Bu durumda, ekinde tarif edildiği gibi tartılır ve hazırlanır.

Kloramfenikol ile Sabouraud dekstroz agarı (Emmons modifikasyonu)

Kloramfenikol stok çözeltisi

- 500 mg kloramfenikol bazı tartı

- 100 ml% 95 etanol ölçün

- karıştırmak

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanır ve ayrıca her bir litre orta için otoklavlamadan önce 10 ml kloramfenikol stok çözeltisi ilave edilir..

Sikloheksimid ile Dekstroz agar Sabouraud Emmons

Sikloheksimid stok çözeltisi

- 5 gr sikloheksimid ağırlığında

- 100 ml aseton ölçün

- karıştırmak

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) daha önce tarif edildiği gibi hazırlanır ve ayrıca her bir litre ortama otoklavlamadan önce 10 ml sikloheksimid stok çözeltisi ilave edilir.

Kloramfenikol ve sikloheksimid içeren Sabouraud dekstroz agarı (Emmons)

Sabouraud dekstroz agar ortamı (Emmons) yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanır ve ayrıca her bir litre ortama otoklavlamadan önce 10 ml kloramfenikol stok çözeltisi ve 10 ml sikloheksimid stok çözeltisi ilave edilir.

Eklenebilecek diğer antibiyotikler

Orta litre başına 20.000 ila 60.000 birim penisilin.

Orta litre başına 30 mg streptomisin.

Her ikisi de, ortamın otoklavlanmasından sonra, hafifçe soğutulmuş (50-55 ° C) dahil edilmelidir..

Besiyeri başına 0.04 g neomisin.

Orta litre başına 0,04 g gentamisin.

Özel hususlar

Güvenlik açısından, sporların dağılmasını ve solunmasını önlemek için Petri kabı yerine kama şeklindeki tüplere (oluk tepe noktasına eğimli) Sabouraud dekstroz agar ekmesi tercih edilir..

Sabouraud agarlı tüplerin pamukla kaplanması ve vidalı bir kapakla kapatılmaması önemlidir, çünkü yarı-aerobik koşulların bazı suşlarda spor oluşumunu engellediği gösterilmiştir. Coccidioides immitis. Ayrıca, çoğu mantar aerobiktir..

Vidalı kapak kullanıyorsanız, sıkıca kapatmayın.

Kalite kontrol

Hazırlanan ortam, düzgün çalıştıklarını doğrulamak için kalite kontrolüne sahip olmalıdır. Bu amaçla, belirli kontrol suşları ekilir.

Sabouraud dekstroz agar için kloramfenikol ATCC suşları ile kullanılabilir. Candida albicans, hangi mükemmel büyüme olmalı. Başka bir plaka, suşlarla aşılanmıştır Escherichia coli, tamamen engellenmeli.

Hiçbir mikroorganizmanın büyümemesi gereken inoküle edilmemiş bir plaka inkübe edilir.

Kloramfenikol ve sikloheksimid içeren Sabouraud dekstroz agar;  Trichophyton mentagrophytes, iyi gelişmeli. Başka bir plaka, bir tür suşu ile aşılanır. Aspergillus flavus, içinde çok az büyüme olması veya hiç büyüme olmaması gerekir. Ek olarak, inoküle edilmiş bir levha sterilitesini göstermek için inkübe edilir.

Sabouraud dekstroz agar için sikloheksimid, suşları Candida albicans, Trichophyton rubrum  veya Microsporum canis, hangi iyi büyüme göstermeli.

Aynı şekilde, bir tür Aspergillus flavus, yetersiz büyüme veya hiç büyüme göstermemek. Sonunda sterilite kontrolü için inoküle edilmemiş bir plakayı inkübe edin.

uygulamaları

Birincil ekim

Klasik Sabouraud dekstroz agar, 4 gram dekstroz içerir ve her bir mantarın karakteristik morfolojisini gösterdiğinden birincil izolasyon ortamı olarak mükemmeldir..

Pigment üretimini göstermek de mükemmeldir. Bununla birlikte, sporu gözlemlemek için en uygun yol değildir..

Ayrıca büyümek için tavsiye edilmez Blastomyces dermatitidis, mevcut yüksek glikoz konsantrasyonuyla inhibe edilir.

Öte yandan, uygulama için bazı düşünceler akılda tutulmalıdır.

Bazı mantarlar küfler gibi oda sıcaklığında daha iyi gelişir, diğerleri bazı mayalar gibi 37 ° C'de başarıyla gelişir, diğerleri ise her iki sıcaklıkta da gelişebilir (dimorfik mantarlar).

Bu sebepten, bazen aynı numunede birkaç Sabouraud agar plakası kullanmak gerekir, çünkü bir plakayı oda sıcaklığında ve bir başka plakayı 37 ° C'de inkübe etmek için sıklıkla iki kez eklenirler..

Örneğin, Sporothrix schenckii iki plaka halinde ekilir; biri kalıp fazını elde etmek için oda sıcaklığında inkübe edilir, diğeri maya benzeri fazı elde etmek için 37 ° C'de inkübe edilir, ancak ikincisinde ortama% 5 kan eklemek gerekir.

Diğer durumlarda, mysetoma örneklerinde olduğu gibi, biri kloramfenikol ve diğeri de sikloheksimid içeren iki tabak Sabouraud agar ekilir. Birincisi, mantar kökenli mycetoma (Eumicetoma) nedensel ajanlarının ve aktinomiyotomalar gibi bakteriyel kökenli mycetomaların ikinci nedensel ajanının büyümesini sağlayacaktır..

sporulasyon

Emmons tarafından modifiye edilen dekstroz Sabouraud agar, 2 gram dekstroz içerir ve sadece izolasyon için değil aynı zamanda mantarların sporlanması ve korunması için de kullanılır..

Bu ortamda suşları kurtarabilirseniz Blastomyces dermatitidis.

koruma

Mantar kültürlerini korumak için buzdolabında (2-8 ° C) saklanabilir. Depolama süresi 2 ila 8 hafta arasında değişebilir. Bu süreden sonra işlemi tekrarlamak için alt kültürlenmeleri gerekir..

Bazı mantarlar, örneğin oda sıcaklığında en iyi şekilde korunur. Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ve Microsporum audounii.

Dekstroz agardan tamamen çıkarılırsa ve ortamdaki agar miktarı kuruluktan kaçınırsa pleomorfizmayı önlemek için suşun bakımı uzatılabilir.

mikrokültürler

Bazı filamentli mantarların tanımlanması için, cinsel ve aseksüel üreme yapılarını gözlemlemek için Sabouraud agar veya başka özel araçlar kullanılarak mikrokültürler yapılması gereklidir..

İnsan mikolojisinde

Esas olarak fungal hastalıkların teşhisinde, özellikle deriyi ve eklerini (saç ve tırnaklar) etkileyenlerde kullanılır..

Örnekler salgı, eksüda, cilt, saç, tırnak, balgam, BOS veya idrar olabilir. Yaygın olarak izole edilen patojenler, deri altı ve sistemik mantar enfeksiyonlarına neden olan dermatofitlerdir;.

Hayvan mikolojisi

Hayvanlar genellikle mantar enfeksiyonlarından etkilenir, bu nedenle Sabouraud agar, insan mikolojisinde olduğu kadar hayvanlarda da faydalıdır..

Örneğin, dermatofitleri sıklıkla hayvanları etkileyebilir. Böyle bir durum Microsporum canis var distortum, sık sık köpekleri, kedileri, atları, domuzları ve maymunları enfekte eder. ayrıca, Microsporum gypseum köpekleri, kedileri ve sığırları enfekte eder.

Tavuk, horoz ve tavuk gibi kuşlar bundan etkilenir. Microsporum gallinae.

Diğer mantarlar gibi Zymonema farciminosum, Bunlar ayrıca hayvanlarda, özellikle atlarda, katırlarda ve eşeklerde, lenfatik damarlarda önemli bir iltihap meydana getiren bir hastalık nedenidir..

Sporothrix schenkii ve Histoplasma capsulatum evcil hayvanları ve insan hayvanlarını etkiler.

Çevresel mikoloji

Pek çok patojenik veya fırsatçı mantar, belirli bir ortamda, özellikle ameliyathanelerde ve Yoğun Bakım Ünitelerinde (YBÜ) klinik ve hastanelerde yoğunlaşabilir. Bu nedenle, onları kontrol etmek gerekir.

Korunmasız diğer alanlar, çevre mantarlarının konsantrasyonundan etkilenebilen kütüphaneler ve eski binalardır..

Çevresel araştırmalarda Sabouraud dekstroz agar mantarların izolasyonunda kullanılır.

Endüstriyel mikoloji

Sabouraud dextrose agar, diğerlerinin yanı sıra kozmetik, yiyecek, içecek, deri, tekstil üretiminde mantar kirletici etkenlerin incelemesinde eksik olamaz.

Bitki mikolojisi

Bitkiler ayrıca, mantarın neden olduğu, bitkinin farklı kısımlarını etkileyen, hasatı sonlandırabilen ve tarımda büyük kayıplara neden olan hastalıklardan muzdariptir..

referanslar

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikozların mikrobiyolojik tanısı ve antifungallere duyarlılık çalışmaları. İspanya Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Derneğinin Önerileri. Erişim: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratuvarı. (2009). Sabouraud dekstroz agar, sikloheksimid ile. Şuradan erişilebilir: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinerlik mikolojisi. Ulusal Tarım Üniversitesi Nikaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott'un Mikrobiyolojik Tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden
5. Casas-Rincon G. Genel Mikoloji. 1994. 2. Baskı, Universidad Central de Venezuela, Kütüphane baskıları. Venezuela, Caracas.