Papa dekstroz vakfı, hazırlanması ve kullanımı

papa dekstroz agarı katı, seçici olmayan, besleyici bir kültür ortamıdır. Bakteriyel ve mantar türlerini yetiştirebilir, ancak kullanımı özellikle filamentli mantar ve maya izolasyonu için endikedir. Ayrıca Patates Dekstroz Agar İngilizce ifadesi ile bir PDA ortamı olarak da bilinir..

Fitopatojenik mantarların, yani bitkileri etkileyenlerin izolasyonunda özellikle yararlıdır. Örnekleri enfekte olmuş bitkilerden bitkilendirmek için, Sabouraud agar veya malta agar gibi diğer ortamlar kullanılabilir, ancak rutin kullanım için, daha fazla sporülasyondan dolayı patates dekstroz agarı tercih edilir..

Aynı zamanda kozmetik, ilaç ve bazı süt ürünleri örneklerinde mantar kolonilerinin sayımı için kullanılır. Aynı şekilde, bu ortamda çok iyi yetişen dermatofitleri araştırmak ve karakteristik pigmentlerini geliştirmek için deri kazıma örnekleri dikmek de elverişlidir..

Patates dekstroz ortamı laboratuarda hazırlanması çok basit ve kolaydır. Adından da anlaşılacağı gibi, patates infüzyonu, dekstroz ve agar-agar içerir. Ek olarak, bakteri üremesini önlemek ve mantar türleri için seçiciliği artırmak için inhibe edici maddeler eklenebilir.

indeks

• 1 Vakfı
• 2 Hazırlık
  • 2.1 - Ev yapımı (ticari olmayan) papa dekstroz ağarın hazırlanması
  • 2.2 - Ticari olarak papa dekstroz agarı hazırlanması
• 3 Kullanım
  • 3.1 Patates dekstroz agarı üzerine bitki numuneleri dikme işlemi
  • 3.2 Cilt, saç veya tırnak pullarının papa dekstroz agar üzerine dikim prosesi
  • 3.3 Tanımlama prosedürü
  • 3.4 Koloni sayımı
  • Mantar soylarının 3.5 bakımı
• 4 kalite kontrol
• 5 Kaynakça

vakıf

Papa dekstroz agar, filamentli mantar ve mayaların gelişimi için gerekli besin öğelerini sağlayan bir kültür ortamıdır..

Patates infüzyonunun glukoz ile kombinasyonu, mantarların tatmin edici bir şekilde büyümesi için mükemmel bir enerji kaynağı sağlar. Agar çevreye tutarlılık sağlayan ise.

Tek başına besiyeri bakteri üremesini engellemez, bu yüzden seçici olmayan bir besiyeridir. Seçici yapmak için tartarik asit veya antibiyotikler gibi engelleyici maddelerin ilavesine ihtiyacınız vardır..

hazırlık

-Patates dekstroz ağarının ev yapımı (ticari olmayan) hazırlanması

Petri yemekler

Aşağıdaki şekilde hazırlanır:

Her şeyden önce, patatesler çok iyi yıkanır, sahip oldukları kirleri temizler. Her şey ve kabukla ince dilimler halinde kesilirler. 200 g patates tartılır ve yarım saat boyunca bir litre damıtılmış su içinde kaynatılır.

Zaman filtrelendikten veya süzüldükten sonra tüm preparatları gazlı bezle.

Elde edilen sıvı bir litreye ulaşana kadar damıtılmış suyla tamamlanır. İnfüzyona 20 g agar-agar ve 20 g dekstroz eklenir, iyice karıştırılır ve 15 dakika boyunca 15 pound basınçta 121 ° C'de otoklavlanır.

50 ° C'ye soğumaya bırakın ve steril Petri kaplarında servis yapın. Hazırlanan plakalar buzdolabında saklanır.

takozlar

Papa dekstroz agar takozları da hazırlayabilirsiniz..

Bu durumda, otoklavda sterilize edilmeden önce, tüplere 12 ila 15 ml ortam yerleştirilir, daha sonra otoklavlanır ve katılaşıncaya kadar özel destekler üzerinde uzanırlar. Buzdolabında sakla.

Ortam pH değeri 5,6 ± 0,2'de kalsa da bazı laboratuvarlar bakteri üremesini önlemek için pH'ı 3,1 ± 0,1'e düşürmek için% 10 tartarik asit ekler.

Bu anlamda, diğer laboratuarlar mantar yetiştiriciliği için seçici hale getirmek ve bakteriyel gelişmeyi önlemek için antibiyotik eklemeyi tercih ediyor.

-Patates dekstroz agarın ticari hazırlanması

Piyasada satılan susuz ortamın 39 gramını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. 5 dakika dinlenmeye bırakın.

Karışım, tamamen çözünene kadar sık ​​sık karıştırılarak ısıtılır. Daha sonra otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edildi.

Plakalar veya takozlar hazırlanabilir. Yukarıda açıklandığı gibi devam et.

PH 5,6 ± 0,2'de kalır. Eğer pH 3,1 isteniyorsa, plakalara servis yapmadan önce 14 ml% 20 steril tartarik asit ilave edilmelidir..

Hazırlanmamış besiyerinin rengi bejdir ve hazırlanır, hafif bulutlu veya yanardöner bir görünüme sahip açık sarıdır..

uygulamaları

Patates dekstroz ağarına bitki örneklerinin ekim işlemi

-Benekli yaprakları için

Yapraklar parçalar halinde kesilir.

% 50 alkol içeren 50 cc'lik bir bardağa, yüzeyi 20 ila 30 saniye dezenfekte etmek için yaprak parçalarını (lekeli ve sağlıklı) yerleştirin. Alkolü alın ve ince yaprakları varsa 40 ila 50 saniye boyunca% 20 sodyum hipoklorit ekleyin ve kabuğu ve kütüğü ise zamanı 80 saniyeye çıkartın.

Sodyum hipoklorit çekin ve steril bir klip ile dezenfekte edilen parçaları alın ve bunları ortamın yüzeyine yerleştirin (en fazla 10 adet). Tarihi yerleştirin ve 20 ila 30 ° C arasında inkübe edin.

-Meyveler ve yumrular için

Meyvenin etli olması durumunda mantardan etkilenen meyveyi açın ve steril bir neşterle parçaları alın, hem hastalıklı hem de sağlıklı kısımları alın ve agarın yüzeyine koyun.

Meyve limon veya portakal gibi narenciyse, tohumlarınızı açıp ekmelisiniz..

Meyvenin yüzeyi etkilendiğinde ve sporlar gözlendiğinde, plaka üzerinde rendelenmiş yöntemi kullanmak en iyisidir; bu, sporlara sterilize edilmiş ve soğutulmuş "L" formundaki bir spatula ile dokunmaktan ve daha sonra agar üzerinde 2 ila 3 kez tohumlayan bir zikzak yapmaktan ibarettir..

-Tahıllar için

Yapraklarda tarif edildiği gibi dezenfekte edilir ve daha sonra agara yerleştirilir..

-Dallar ve gövdeler için

Kabuk kazıma işlemi gerçekleştirilir ve daha sonra sağlıklı ve hastalıklı kısmın parçaları doğrudan agarın üzerine alınır ve ekilir..

Ekili plakalar aerobiyozda 20-30 ° C'de 72 saat inkübe edilir.

Papa dekstroz agar üzerine cilt, saç veya tırnak kantarı örnekleri dikme işlemi

Numune, etkilenen kılları, cilt pullarını veya dermatofitleri bulmak için tırnakları kesmek için 11 numara bir neşter bıçağı kullanılarak alınmalıdır. Numune almadan önce, alan% 70 alkol ile dezenfekte edilmelidir.

-Cilt örneği

Pullu lezyonlarda, mantarı bulma olasılığı daha fazla olduğundan lezyonun kenarı kazınmalıdır..

Eksudatif lezyonlarda, numune kuru veya ıslak bezle alınır. Patates dekstroz agarı veya Sabouraud agarı üzerine hemen ekmek. Ulaşım araçları kaçının.

Bir başka örnekleme yöntemi ise Mariat ve Adan Campos'un halı kare tekniğidir. Bu durumda, etkilenen bölge daha fazla yetiştirme için bir parça steril yün ile 5 kez ovulur..

Örnek doğrudan kültür ortamına yerleştirilebilir.

-Saç örneği

Patolojiye bağlı olarak, etkilenen kısım kökler tarafından kesilebilir veya yırtılabilir. Örneği kültür ortamına yerleştirin.

-Tırnak örnek

Etkilenen tırnağın belirli bir kısmını kazıyabilir veya kesebilirsiniz. Yaralanma türüne bağlı olacaktır.

Mantarın kültür ortamı ile temas olasılığını arttırmak için ekimden önce numuneyi 1 mm'lik parçalar halinde kesin..

Tanımlama prosedürü

Plakada elde edilen koloniler, kolonilerin makroskopik çalışmasını (görünüm, renk, tutarlılık, gelişme derecesi) gerçekleştirmek için patates dekstroz agar içeren tüplerde izole edilir..

Mikroskopik çalışma (yapıların ve oluşumlarının gözlenmesi), mikro kültürler veya lamina ve lamella arasındaki mikroskop altında doğrudan gözlem yapılabilir.

Koloni sayısı

Bu ortam ayrıca bitki örneklerinde, gıdalarda, kozmetiklerde veya ilaçlarda bulunan mantar ve mayaların yükünü belirlemek için de kullanılabilir. Bu amaçla, antibiyotiklerle takviye edilmiş papa dekstroz agar, örneğin: (kloramfenikol, klorotetrasiklin veya her ikisi) kullanılır..

1 ml örnek - tercihen seyreltilmiş - steril ve boş bir petri kabına dökün, sonra bir patates dekstroz agar tapa eritin ve 45 ° C'ye soğumaya bırakın Petri kabının üzerine dökün ve homojenleşene kadar döndürün. Katılaşana kadar dinlendirin..

Aranan mantarın türüne ve numune tipine bağlı olarak aerobiyozda 20-25 ° C'de (kalıplar) veya 30-32 ° C'de (maya) 5 ila 7 gün veya daha uzun süre inkübe edin. Her iki sıcaklık aralığında da inkübe etmek için iki plaka kullanılabilir.

Mantar soylarının bakımı

Papa dekstroz agarı, canlı mantar suşlarını birkaç yıl boyunca korumak için kullanılabilir..

Bunu yapmak için, mantar papa dekstroz agar takozlarında ekilir ve mantar büyüdükten sonra mineral yağ ile kaplanır. Yağ bir otoklavda 45 dakika boyunca sterilize edilmeli ve yaklaşık 300 ila 330 Saybolt viskozitesine sahip olmalıdır. Yağ, konik ucun 1-2 cm'yi aşmalıdır.

Kalite kontrol

Hazırlanan her partiden bir veya iki plaka alınmalı ve 25 ° C'de 48 saat veya 20 ° C'de 96 saat inkübe edilmelidir. İyi bir sterilite kontrolü, koloni gelişimi olmadığı bir kontrol birimidir..

Ayrıca bilinen veya sertifikalı kontrol türleri:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Her durumda iyi büyüme beklenir..

referanslar

1. Laboratuvarlar Britania. Baba glikozado ağarı. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
2. Neogen Laboratuvarları Patates Dekstroz agarı. Erişim: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratuvarı Patates dekstroz ağarı. Uygun fiyat: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
5. Casas-Rincon G. Genel Mikoloji. 1994. 2. Baskı, Universidad Central de Venezuela, Kütüphane baskıları. Venezuela, Caracas.
6. Aceituno M. 2005 yılında Farmakope Usp Referans Metoduna Göre Ulusal Üretim Laboratuarının Kompakt Toz Tipinde Göz Farı Mikrobiyolojik Kalitesinin Değerlendirilmesi. Farmasötik Kimyager unvanı için yeterlilik tezi. San Carlos de Guatemala Üniversitesi.
7. Cuétara M. Yüzey örneklerinin işlenmesi. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; s. 1-12