Agar Müeller Hinton Vakfı, hazırlık ve kullanım



Müeller Hinton agar Et infüzyonu, kazein asit peptonu, nişasta, ağar ve damıtılmış sudan oluşan katı, seçici olmayan bir besin maddesidir. Bu ortam, en hızlı büyüyen bakterilerin mükemmel bir mikrobiyal gelişimine izin verir.

Aslen John Howard Müeller ve Jane Hinton tarafından besleyici olarak zorlayıcı bakterileri izole etmek için yaratılmıştır. Neisseria gonorrhoeae ve Neisseria meningitidis. Bununla birlikte, özelliklerinden dolayı, antibiyotiklere duyarlılığı incelemek, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlamak için ideal olduğu ortaya çıktı..

Bu nedenle Müeller Hinton agar, Kirby disk difüzyon yöntemiyle antimikrobiyal duyarlılık testinin uygulanması için Klinik ve Laboratuar Standartları Enstitüsü (CLSI) ve Avrupa Antimikrobiyal Duyarlılık Testleri Komitesi tarafından kabul edilen kültür ortamıdır. Bauer.

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 Hazırlık
  • 3 Kullanım
    • 3.1 Antimikrobiyal teknik
    • 3.2 Müeller Hinton agar'a disklerin stratejik yerleştirilmesi
  • 4 hatalı sonuçların nedenleri
  • 5 Sınırlama
  • 6 kalite kontrol
  • 7 Kaynakça

vakıf

Seçici olmayan bir beslenme ortamı olduğundan, çoğu patojenik bakterinin büyümesi için mükemmeldir..

Öte yandan, basit bileşimi, maddelerin kolayca dağılmasını sağlar ve disk difüzyon yöntemiyle duyarlılık testi için temel bir özelliktir..

Karakteristiklerinden bir diğeri, sülfonamidlerin, trimetoprimin ve tetrasiklinlerin etkili bir şekilde değerlendirilmesine izin veren düşük miktarda inhibitör içermesidir..

Bununla birlikte, ortamın düzgün çalışmasını sağlamak için belirli koşulları sağlaması gerektiği akılda bulundurulmalıdır:

PH ayarı, agar derinliği ve yeterli miktarda timin, timidin, Ca++, mg++ ve Zn++.

Metodolojinin standartlaştırıldığını ve dolayısıyla tüm parametrelerin yerine getirilmesi gerektiğini de bilmeliyiz:

Aşı maddesinin konsantrasyonu, antibiyotik disklerin konsantrasyonu ve korunması, agar üzerine uygun sayıda disk yerleştirilmesi, bir disk ile diğeri arasındaki mesafe, belirli antibiyotiklerin stratejik yerleşimi, atmosfer, sıcaklık ve zaman inkübasyon.

hazırlık

Susuz Müeller Hinton besiyerinden 37 gr tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Çözünmesine yardımcı olmak için karıştırırken ortamı ısıtın. 1 dakika kaynatın.

Otoklavı 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarırken fiolaların soğuması için 50 ° C'de bir su banyosuna yerleştirilmesi gerekir. Çapı 10 cm steril Petri kaplarına 25 ila 30 ml dökün.

Plakaların ortalama kalınlığı 4 mm (ideal) olmalı, izin verilen 3-5 mm aralıklarla olmalıdır..

Müeller Hinton agar baz kullanılarak kan agarı hazırlamak istenirse, plakalara servis yapmadan önce% 5 steril ve defibrinlenmiş kuzu kanı dökülür..

Ortamın nihai pH değeri 7.2 ila 7.4 arasında olmalıdır..

Kullanana kadar buzdolabında yatırım yapın ve saklayın. Kullanmadan önce plakanın oda sıcaklığına gelmesine izin verin.

Hazırlanan besiyerinin rengi açık bej.

uygulamaları

Hızla büyümeyen patojenlerin çoğuna antibiyogram veya antibiyotik duyarlılık testi yapmak için kullanılır.

Agar kanla desteklenmişse, aşağıdakiler gibi zorlu mikroorganizmaların antibiyogramını gerçekleştirmeye yarar: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, diğerleri arasında. Ayrıca yalıtmak için kullanılmıştır Legionella pneumophila.

Antibiyogram tekniği

Antibiyogramı gerçekleştirmeden önce, 1.5 x 10'a eşit bir bakteri çözeltisi hazırlanmalıdır8 hücre.

Bunu yapmak için, saf kültürden 3 ila 4 koloni alınır ve 2 ila 6 saat kuluçkalanır ve triptikaz soya suyunda veya Müeller Hinton suyunda süspanse edilir ve konsantrasyon, bir Mac Farland standardı ile karşılaştırılarak steril salinle ayarlanır. % 0.5.

Mikroorganizmalar talep ediyorlarsa, koloniler Mac Farland'ın% 0.5 konsantrasyonuna ulaşana kadar doğrudan askıya alınabilir. Daha sonra Müeller Hinton plakası hazırlanan bakteriyel çözelti ile emprenye edilmiş bir bezle ekilir.

Bunu yapmak için, swabı çözeltiye daldırın ve sonra fazla sıvıyı tüpün duvarlarına bastırarak çıkarın. Çubuk, tüm yüzeyden geçtikten hemen sonra, dokunulmamış alanlar bırakmadan, ardından plakayı hafifçe döndürün ve tekrar ekin. İşlem 2 kez daha tekrarlandı.

10 dakika bekletin ve daha sonra aralarında 24 mm boşluk bırakarak steril forsepsli antibiyotik diskleri yerleştirin. Her diski agar üzerine yerleştirdikten sonra, birbirlerine tam olarak oturduğundan emin olmak için kelepçeli hafifçe bastırın.

İşlemden sonra, plaka ters çevrilir ve aerobiyozda 35-37 ° C'de 16 ila 18 saat inkübe edilir. Zorlu bir mikroorganizma ise, mikroaerofilik gerektirebilir ve antibiyogram oksasilin diskleri içeriyorsa 24 saatte okunması gerekir..

Her halo çapını ölçmek için bir cetvel kullanılır. Sonuçlar mm cinsinden kaydedilmelidir. Daha sonra, elde edilen değerler mevcut CLSI kılavuzunda yayınlanan kesme noktaları tablolarıyla ilişkilendirilmiştir.

Durum olarak olabileceği gibi hassas (S), orta seviye (I) veya dirençli (R) olarak bildirin..

Antibiyotikler, izole edilmiş mikroorganizma ve meydana gelen enfeksiyon tipine göre seçilir..

Bazen antibiyotiklerin stratejik yerleştirilmesinin fenotipik direnç örüntülerini gösterdiği düşünülmelidir..

Disklerin Müeller Hinton agar'a stratejik yerleşimi

Enterobakteriler için, klavulanik asit diski 3. ve 4. kuşak sefalosporinlerin önüne yerleştirilmelidir. Yumurta şeklindeki genişleme, türün genişletilmiş spektrumlu beta-laktamaz (ESBL) üreticisi olduğunu gösterir. Bu, hastanın herhangi bir sefalosporin ile tedavi edilmemesi gerektiği anlamına gelir.

Staphylococcus'ta eritromisin veya azitromisin diskinin klindamisin diskinin önüne yerleştirilmesi önemlidir (D-testi).

Eritromisine dirençli bir halo ve klindamisin halindeki düzleme, suşun klindamisine, suşa (RIC) indüklenebilir bir dirence sahip olduğunu gösterir. Bu, klindamisin ile yapılan tedavinin etkili olmayacağı anlamına gelir..

Enterobacteriaceae ve bazı fermente etmeyen Gram negatif basillerde indüklenebilir AMP C suşlarının araştırılması için, seftazidime, sefoksitin veya piperasilin tazobaktan diskleri, 27 mm mesafede imipenem disk ile karşı karşıya kalmaktadır..

İmipeneme bakan disklerden birinde düzleştirilmiş bir halo, indüklenebilir AMP C'nin varlığını gösterir..

Oluşturan AMP C'nin araştırılması için, bir kloksasilin 500 ug disk, 25 mm'lik bir mesafede, seftazidim (30 ug) ve sefotaksim (30 ug) ile karşı karşıyadır. Sefalosporinlerin birinde genişletilmiş bir halo pozitifliği gösterir.

Cloxacillin diski ayrıca 18 mm'lik bir mesafede bulunan fenil boronik asitle (400 μg) emprenye edilen 9 mm'lik Whatman No. 6 filtre kağıdının yerine de yerleştirilebilir. Önceki ile aynı şekilde yorumlanır..

Son olarak, özellikle metalo-beta-laktamazların üretimini araştırmak Pseudomonas aeruginosa, 10 µl etilendiaminetetraasetik asit (EDTA 750 )g) ve imipenem ve meropenem disklerine bakan tioglikolik asit (SMA 300 μg) ile emprenye edilmiş bir disk 15 mm'lik bir mesafede kullanılır.

Eğer imipenem veya meropenem halüslerinin EDTA / SMA diskine doğru genişlemesi durumunda test pozitif sonuç verir. Bu sonuç, değiştirilmiş Hodge testi ile onaylanmalıdır..

Bu yöntem, bir türün inoküle edilmesinden oluşur Escherichia coli Müeller Hinton plakasında ATCC 25922. Plakanın ortasına bir imipenem diski yerleştirilir ve daha sonra suşu ile birlikte diskin çevresine doğru bir oluk yapılır. P. aeruginosa Şüpheli. Plaka başına 4 suşları test edebilirsiniz.

Stria çevresinde imipenem halo bir bozulma bölgesi varsa test pozitif olacaktır..

Hatalı sonuçların nedenleri

-Kötü korunmuş antibiyotiklerin diskleri yanlış dirençler üretebilir. Örneğin, oksasilin diski sıcaklık değişimlerine karşı çok savunmasızdır.

-Belirtilen (asit) altındaki ortamın pH'ı, aminoglikozitler ve makrolidlerde daha küçük halolar (yanlış direnç riski) ve penisilin, tetrasiklin ve novobiyosinde daha büyük halolar (yanlış hassasiyet riski) oluşturur.

-PH belirtilen (alkalin) değerin üstünde ise yukarıda açıklanan etkiler tersine çevrilir..

-Yüksek timin ve timidin konsantrasyonlarına sahip ortamlar, sülfonamidlerin ve trimetoprimin inhibisyon halolarını önemli ölçüde azaltır.

-Yüksek kalsiyum ve magnezyum konsantrasyonları, aminoglikozitlerin, polimiksin B'nin ve tetrasiklinlerin suşlarına karşı yanlış direnç üretmektedir. Pseudomonas aeruginosa.

-Düşük kalsiyum ve magnezyum konsantrasyonları, aminoglikositlerin, polimiksin B'nin ve suşlarına karşı tetrasiklinlerin hassas hassasiyetlerini üretir. Pseudomonas aeruginosa.

-Çinko varlığı, karbapenem disklerinin (imipenem, meropenem ve ertapenem) sonuçlarını etkiler..

-3 mm'nin altındaki ortamın kalınlığı yanlış hassasiyet sonuçları verirken 5'in üzerindeki kalınlıklar yanlış direnç üretecektir.

-Disklerin antibiyogramdaki mobilizasyonu, antibiyotik boşalması hemen gerçekleştiğinden deforme haleler verecektir.

- Çok zayıf inokülümler sonuçları etkiler, çünkü agarda tek biçimli veya birleşik bir büyüme olmayacağından, halojenlerin normalden daha büyük verebileceğine ek olarak, inhibisyon bölgelerini ölçebilmek için gerekli bir koşul.

-Aşırı yüklenmiş inokula normalden daha küçük haleler verebilir.

-Diskler arasındaki mesafeye saygı göstermemek, bir halo bir diğerinin üst üste binmesine neden olur ve doğru okunamıyor.

-CO ile inkübe edin2 tetrasiklin ve metisilin disklerinin halelerinin boyutunu arttırır.

-35 ° C'nin altındaki sıcaklıklarda inkübasyon daha büyük halojenler üretir.

-Kan eklenmesi, sülfonamidlerin halo boyutunu azaltır.

sınırlama

Bir antibiyotiğin antibiyogramda mikroorganizmaya karşı gösterdiği duyarlılık (in vitro) çalışacağının garantisi değil in vivo.

Kalite kontrol

Ortamın doğru miktarda timin içerip içermediğini bilmek için, bir tür ekilmelidir Enterococcus faecalis ATCC 29212 ve trimetoprim sülfametoksazole (SXT) duyarlılığı test etmek, tatmin edici olması için eşit veya> 20 mm bir halo vermelidir.

referanslar

  1. "Agar Müller-Hinton." Vikipedi, özgür ansiklopedi. 16 Kasım 2018, 12:23 UTC. 27 Ocak 2019, 04:22
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  3. Cona E. Agar difüzyon testi ile iyi bir duyarlılık çalışması için koşullar. Rev Chil Enfeksiyonu, 2002; 19 (2): 77-81
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarı. % 5 koyun kanı ile Müeller Hinton ağarı. 2009. Şurada mevcuttur: http://f-soria.es
  5. BD Müeller Hinton II Agar laboratuvarı. 2017. Tarafından bulunabilir: .bd.com
  6. Laboratuvarlar Britania. Müeller Hinton agar. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  8. Martínez-Rojas D. Betalaktamaz tip AmpC: Genel ve fenotipik saptama yöntemleri. Rev. Soc. Microbiol. 2009; 29 (2): 78-83. Erişim: scielo.org.
  9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. Klinik izolatlarında metalobetalaktamazların fenotipik tespiti Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121. Erişim: scielo.org.