Agar M.R.S kuruluş, hazırlık ve kullanım



agar M.R.S. laktik asit bakterilerinin, özellikle Lactobacillus cinsinin izolasyonu ve sayımı için kullanılan seçici bir katı kültür ortamıdır. Bu agar 1960 yılında aynı adı taşıyan ortadaki Man, Rogosa ve Sharpe tarafından yaratılmıştır, ancak karmaşıklığı nedeniyle M.R.S kısaltması sıklıkla kullanılmaktadır..

Proteoz pepton, et özü, maya özü, glikoz, sorbitan monoleat, dipotasyum fosfat, sodyum asetat, amonyum sitrat, magnezyum sülfat, manganez sülfat ve agardan oluşur..

Bu bileşim, dışkı, vajinal sekresyon, oral numuneler ve anne sütü gibi klinik numunelerden süt ürünleri ve etli yiyecekler gibi laktik asit bakterilerinin doğru gelişmesine izin verir..

Klinik laboratuarlarda rutin olarak kullanılmaz, çünkü laktik asit bakterileri nadiren patolojik süreçlere katılır. Bununla birlikte, M.R.S agar kullanımı gıda mikrobiyolojisi alanında daha sık görülür..

Öte yandan, bu ortam, amacı laktik asit bakterilerinin araştırılması olan bazı Araştırma Merkezleri tarafından kullanılmaktadır..

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 Hazırlık
  • 3 Kullanım
    • 3.1 Kolonilerin özellikleri
    • 3.2 Laktik asit bakterilerinin izolasyonu
    • 3.3 Laktik asit bakterilerinin sayımı
    • 3.4 Araştırma düzeyinde
  • 4 kalite kontrol
  • 5 Kaynakça

vakıf

Agar Man, Rogosa ve Sharpe oldukça karmaşık bir bileşime sahiptir. Her bir bileşeninin yerine getirdiği işlevi parçalayarak temeli açıklanabilir..

Proteoz peptonu, et özü, maya özü ve glikoz, bakteri üremesi için gerekli karbon, azot, vitamin ve mineral kaynağı sağlayan besinlerdir. Ek olarak, glikoz çoğu kültür ortamında kullanılan evrensel enerji kaynağıdır..

Öte yandan, laktik asit bakterilerinin büyümesini desteklemek için, Lactobacillus ve ilgili bakterilerin metabolizmasında vazgeçilmez kofaktörlerin (katyonlar) bulunması gerekir; Bu bileşikler sodyum, magnezyum ve manganez tuzlarıdır.

Aynı şekilde, sorbitan monoleat veya polisorbat 80, besin olarak absorbe edildiğinde önemli bir yağ asidi kaynağıdır..

Ek olarak, sorbitan monoleat ve amonyum sitrat, beraberindeki floranın, özellikle Gram negatif bakterilerin gelişmesini engelleyerek, bu agarın seçici karakterini sağlar..

Son olarak, agar-agar ortama katı tutarlılık veren şeydir.

Man Rogosa Sharpe agar'ın başka çeşitleri de var; bunlardan biri sisteinle (M.R.S.c) desteklenmiş, diğer mikroorganizmaların yanı sıra bifidobakterilerin izolasyonu için çok yararlıdır. Öte yandan, özellikle süt ürünlerinde bifidobakterilerin selektif sayımı için neomisin, paromomisin, nalidiksik asit ve lityum klorür ile takviye edilmiş MRS ortamı vardır..

hazırlık

Susuz ortamın 68.25 gramını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. 5 dakika bekletin. Bütünüyle erimek için, sıkça karıştırarak bir ısı kaynağına getirin ve 1 ila 2 dakika kaynatın. Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin.

Otoklavdan ayrılırken birkaç dakika bekletin ve steril petri kaplarında sıcak olarak dağıtın.

Plakaları katılaştırmak ve tersine çevirmek, plakaları sıralamak ve kullanılana kadar buzdolabında saklamak için izin verin. Plakaları kullanmadan önce oda sıcaklığına getirin.

Ortamın pH değeri 6.4 ± 0.2 olmalıdır. Bazı ticari evler pH'ı 5.5 ila 5.9 arasında tavsiye eder..

Susuz ortam bej ve hazırlanmış koyu sarı.

Hem kurutulmuş ortam hem de hazırlanan plakalar 2 ila 8 ° C'de saklanmalıdır.

uygulamaları

Agar plakaları M.R.S. yüzeyde ekilebilirler (tükenme veya Drigalski spatulasıyla). Ayrıca derinliğe ekilebilir. Plakalar, 37 ° C'de mikroaerofilik (% 4 O) inkübe edilmelidir.2 ve% 5-10 oranında CO2) 24 ila 72 saat.

Tohumlama yöntemi takip edilen amaca göre seçilir (izolasyon veya sayma).

Kolonilerin özellikleri

Lactobacillus'un varsayımsal kolonileri beyazımsı renkte büyür ve bu agar üzerinde mukoid veya kremsi bir görünüme sahiptir. O zaman tanımlamalılar.

Laktik asit bakterilerinin izolasyonu

Bu amaçla, yüzeyden dikim kullanılır. Dikilen numuneler önceki bir prosedür gerektirir.. 

Anne sütü numuneleri durumunda, yağlı tabakayı çıkarmak için, numunenin 1 ml'sini 14.000 rmp'de 10 dakika santrifüj etmeniz önerilir. 900 ul atılır ve geri kalan 100 ul'de sediment askıya alınır ve M.R.S.'ye dökülür. O zaman Drigalski spatulasıyla eşit şekilde dağıtılmalıdır..

Dışkı numuneleri durumunda, bir (1) gram dışkı tartılır ve 1/10 dilüsyona karşılık gelen 9 mL% 0.1 steril peptonlu su içinde homojenleştirilir. Daha sonra 10'luk bir son dilüsyon elde edilinceye kadar seri dilüsyonlar yapılır-4.

Son olarak, dilüsyonların 10 100 ul alınır-2, 10-3 ve 10-4 ve her dilüsyon, bir Drigalski spatula ile düzgün bir şekilde dağıtılan MRS agar üzerine ekilir.

Laktik asit bakterilerinin sayımı

Bu durumda tohumlama derinlemesine yapılır.

Anne sütü numuneleri için 1 mL alın ve steril bir konik plastik tüpe yerleştirin. MRS agar, yaklaşık 40 ° C'lik bir sıcaklıkta, 25 mL'lik bir nihai hacme kadar ilave edilir ve homojen bir karışım elde edilir. Daha sonra, homojen bir şekilde steril petri kaplarına dökülür ve polimerleşene kadar bekletilir..

Dışkı örnekleri için dilüsyonlar yukarıda tarif edildiği gibi yapılır. Her dilüsyondan 1 mL alın ve steril konik plastik tüplere yerleştirin. Erimiş MRS agar 25 mL'lik bir hacme eklenir.

Her dilüsyonun karışımı, steril Petri kaplarına düzgün bir şekilde dökülür. Sonunda polimerizasyona kadar beklemesine izin verin.

Araştırma düzeyinde

Her gün laktik asit bakterilerinin incelenmesi daha ilginç hale gelir; özellikle araştırmacılar, diğer kullanımların yanı sıra, süt ürünlerinin imalatında standardizasyon için fermentler başlatmak için yeni suşları ve potansiyellerini bilmek istiyorlar.

Bu anlamda, Alvarado ve ark. (2007), M.R.S. ağarını kullanmıştır. Venezüella peynirinin içtiği bir zanaatkârda bulunan laktik asit bakterilerini izole ettikleri, tanımladıkları ve karakterize ettikleri bir çalışma yapmak.

Peynirde, Lactococcus ve Lactobacillus cinsinin bakteri varlığını buldular ve izole edilmiş suşların karışımlarının pastörize sütten peynirlerin imalatında başlangıç ​​suşları olarak uygun olduğu sonucuna varıldı..

Öte yandan, Sánchez ve ark. (2017), M.R.S agar'ı kullandı. Sağlıklı domuz yavrularının üretkenliğini artıran doğal probiyotikler olarak kullanmak amacıyla domuz yavrularının sindirim kanalındaki laktik asit bakterilerinin varlığını araştırmak.

Bu araçla dört türü izole etmeyi başardılar: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ve Pediococcus pentosaceus.

Aynı şekilde, Báez ve ark. (2019), M.R.S. agar'ı kullandı. anne sütünde ve bebeklerin dışkılarında laktik asit bakterilerini (BAL) ve probiyotik potansiyeline sahip bifidobakterileri değerlendirmek.

11 BAL ve 3'ü izole etmeyi başardılar Bifidobacteria sp anne sütünde ve 8 BAL ve 2 Bifidobacteria sp. dışkıda Hepsi onları probiyotik aktiviteye sahip bakteri olarak aktive eden bazı parametrelerle karşılaştı.

Yazarlar hem anne sütünü hem de sadece anne sütüyle beslenen bebeklerin dışkısının doğal probiyotik bakteri kaynakları olarak hizmet ettiği sonucuna varmışlardır..

Kalite kontrol

M.R.S.’nin kalitesini değerlendirmek kontrol suşları aşağıdaki gibi kullanılabilir:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli ve Bacillus cereus.

Beklenen sonuçlar ilk 6 bakteri için tatmin edici bir büyümedir. E. coli ve Bacillus cereus tamamen engellenmelidir.

referanslar

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. And El Yapımı Füme Venezüella Peynirinden Laktik Asit Bakterilerinin İzolasyonu, Tanımlanması ve Karakterizasyonu. Starter Yetiştiriciliği Olarak Kullanımı. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Erişim: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Lakro Asit Bakterilerinin Alfaro'nun Piglet Sindirim Sisteminden İzolasyonu. Rev. araştırması. veteriner. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Erişim: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Anne Sütü'ndeki ve bebeklerin dışkılarında laktik asit bakteri ve Bifidobakterilerin değerlendirilmesi, Acevedo, Miranda 2017'de. Biyo-deneyler. Carabobo Üniversitesi, Venezuela.
  4. İngiliz Laboratuvarı M.R.S agar. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  5. Wikipedia katılımcıları. MRS ağarı Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 10 Ocak 2018, 19:44 UTC. Erişim: wikipedia.org Erişim 17 Şubat 2019.
  6. Roy D. Süt ürünlerinde bifidobakterilerin izolasyonu ve sayımı için medya. Int J Gıda Mikrobiyolojisi, 200.128; 69 (3): 167-82.