Agar LIA (Lysine Iron) temeli, hazırlanması ve kullanımı

LIA ağarı (Lisin Demir) Enterobacteriaceae familyasının bakterilerini tanımlamak için kullanılan bir biyokimyasal testtir. Bu ortam Falkow'un formülüne dayanan Edwards ve Fife tarafından oluşturuldu..

Başlangıçta bu test pepton, maya özü, glikoz, L-lisin, mor bromosresol ve damıtılmış su içeren bir et suyuydu. Edwards ve Fife, agar-agar, ferrik amonyum sitrat ve sodyum tiyosülfat ekledi.

Test, temel olarak, L-lisinin amino asidinin karboksil grubu ile reaksiyona girebilen lizin dekarboksilaz enziminin varlığını göstermekten oluşur. Amino asitin bir deaminasyonu, lizin deaminaz enziminin varlığından dolayı da oluşabilir..

Ek olarak, ortamın bileşimi bazı bakteri türlerinin hidrojen sülfit üretme kapasitesini göstermeye izin verir. Son olarak, ortada gaz oluşumunu veya olmadığını gözlemlemek de mümkündür..

indeks

• 1 Vakfı
  • 1.1 Peptonlar ve maya özütü
  • 1.2 Glikoz
  • 1.3 L-lizin
  • 1.4 pH göstergesi (mor bromosresol)
  • 1.5 Amonyum ferrik sitrat ve sodyum tiyosülfat
• 2 Testin yorumlanması
  • 2.1 Lisinin dekarboksilasyonu
  • 2.2 Lisinin işlenmesi
  • 2.3 Hidrojen sülfit üretimi (H2S)
• 3 Sonuçların kaydı
• 4 Hazırlık
• 5 kullanır
• 6 Kaynakça

vakıf

Peptonlar ve maya özü

Çoğu kültür ortamı gibi, demir lizin agarı bakteri gelişimi için gerekli besin kaynaklarını sağlayan bileşenler içerir. Bu bileşenler peptonlar ve maya özü ile temsil edilir..

glikoz

Ayrıca, bu agar fermente edilebilir bir karbonhidrat glikozu içerir. Enterobacteriaceae ferment glikoz ailesinin tüm bakterilerinin bilindiği.

Bu adım çok önemlidir, çünkü ortamın asitleştirilmesinden sorumlu olacaktır, eğer varsa lizin dekarboksilaz enzimi için mevcutsa substratı üzerinde etkili olması için gerekli bir şarttır..

Bazı bakteri cinslerinde, glukoz fermantasyonundan kaynaklanan gaz üretimi gözlenebilir.

Gaz, tüpün içinde agar yer değiştirdiğinde, tüpün altında boş bir alan bırakıldığında veya besiyerini iki veya daha fazla kısımda kırarak ortaya çıkar.

L-lisin

Lisin dekarboksilatlandıktan sonra, bir diamin (kadaverin) ve karbon dioksit oluşur..

Dekarboksilasyon, koenzim piridoksal fosfat varlığında meydana gelir. Bu reaksiyon geri döndürülemez.

PH göstergesi (bromocresol moru)

Ortamda meydana gelen pH değişimlerinin tümü farklı reaksiyonlarla, bromosresol mor pH göstergesi ile tespit edilir..

Bu anlamda, asitlenme olduğunda, ortam sararır ve alkalizasyon olduğunda, ortam orijinal mor veya mor renge döner..

Lizin deaminasyonu, lizin deaminaz enziminin varlığı ile gerçekleştiğinde, yüzeyde, Proteus, Providencia cinsi ve bazı Morganella türlerinde tipik olarak kırmızımsı bir renk oluşur..

Bu, demleme işlemi sırasında yukarıda belirtilen renge neden olan, oksijen varlığında amonyum sitrat ile reaksiyona giren alfa-keto-karbonik asidin oluşması gerçeğinden kaynaklanmaktadır..

Amonyum ferrik sitrat ve sodyum tiyosülfat

Öte yandan, hidrojen sülfit üreten bakteriler, H'nin geliştiricisi olan sodyum tiyosülfat (kükürt kaynağı) ve ferrik amonyum sitratın varlığı ile kanıtlanacaktır.₂S.

Tiyosülfat redüktaz enzimine sahip bakteriler, mevcut sodyum tiyosülfatın indirgenmesi, sülfit ve hidrojen sülfit (H oluşumu) oluşması ile etki etme kabiliyetine sahiptir.₂S).

Sonuncusu renksiz bir gazdır, fakat demir tuzu ile reaksiyona girdiğinde, çözünmeyen bir bileşik olan metalik demir sülfürü oluşturur (görünür siyah çökelti).

Ancak, H oluşumu kapasitesi₂Bu besiyle S güvenilir değildir, çünkü H üretebilen bazı negatif lizin dekarboksilaz bakterileri₂S, siyah çökelti oluşturmaz, çünkü ortamın asitliği engeller. Bu nedenle, demir içeren diğer yollarla kontrol etmeniz önerilir..

Testin yorumlanması

Lisinin dekarboksilasyonu

Tüpler 24 saatlik inkübasyonun bitiminden sonra okunmalıdır, aksi takdirde reaksiyonu yanlış yorumlama riski vardır;.

Gerçekleşecek ilk reaksiyonun glukozun fermantasyonu olacağı unutulmamalıdır, bu nedenle 10 ila 12 saat sonra tüm tüpler sarıya dönecektir..

Kuluçka süresinin sonunda (24 saat) mor veya mor bir yüzeye sahip sarı bir arka plan gözlenirse, reaksiyon negatiftir. Yüzeyin mor rengi, pepton kullanımıyla besiyerinin alkalileşmesine karşılık gelir..

Olumlu bir reaksiyon, tüpün tabanının ve yüzeyinin tamamen mor olduğu bir reaksiyondur, yani orijinal rengine geri döner..

Bu nedenle, testin pozitifliğini belirleyen kişi besiyerinin tabanı veya altıdır. Renk hakkında şüpheleriniz varsa, aşılanmamış bir LIA tüpüyle karşılaştırabilirsiniz..

Lisinin işlenmesi

Lisinin deaminasyonunu kanıtlayan bir tüp kırmızımsı kahverengi bir yüzeye ve sarı bir arka plana (asit) veya tüm kırmızımsı kahverengi tüpe sahip olacaktır..

Bu reaksiyon, lisinin dekarboksilasyonu için negatif, lisinin deaminasyonunda pozitif olarak yorumlanır..

Bu reaksiyon, eğimde tanımlanır ve yorumlanır..

Hidrojen sülfit üretimi (H₂S)

Ortamın tamamı veya bir kısmında siyah bir çökeltinin ortaya çıkması ile pozitif bir reaksiyon gözlenir. Genellikle eğim sınırı ve taban arasında.

Çökelti tüp boyunca meydana gelirse, ortamda meydana gelen diğer reaksiyonları göstermeyecektir..

Sonuçların kaydı

Testi yorumlarken sonuçlar aşağıdaki gibi kaydedilir:

Önce eğimi, sonra alttaki ya da taco, ardından H'nin üretimini okuyun.₂S ve nihayet gaz üretimi.

Örnek: K / A + (-). Bunun anlamı:

• K: Alkali çerçeve (mor)
• C: Asit (sarı) arka plan, yani negatif dekarboksilasyon reaksiyonu ve negatif deaminasyon.
• +: Hidrojen sülfit üretimi
• (-): Gazsız.

hazırlık

35 gr lizin agar susuz demir tartılır ve bir litre saf su içinde çözülür.

Agar tamamen eriyene kadar ısıtın, sık sık karıştırarak bir dakika kaynatın. Pamuk kapaklı 13/100 test tüplerinde 4 ml ortamın dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve eğimli bir şekilde, derin bir taban ve kısa bir eğim olacak şekilde dinlenmeye bırakın..

Buzdolabında 2-8 ° C saklayın Bakteriyel suşu ekmeden önce tavlanmaya izin verin.

Susuz ortamın rengi bejdir ve ortam hazırlanan kırmızımsı mor renktedir..

Hazırlanan ortamın son pH değeri 6.7 ± 0.2'dir.

Ortam pH 5,2'ye eşit veya daha az olduğunda sararır ve pH 6,5'de mor olur..

uygulamaları

Bu test, diğer biyokimyasal testlerle birlikte, Enterobacteriaceae familyasından basilleri tanımlamak için kullanılır..

Ortam, düz bir ilmek veya iğne ile ekilir, tüpün dibine bir veya iki zımba yapılır ve ardından ortamın yüzeyi zikzaklanır..

24 saat 35-37 ° C'de aerobiyozda inkübe edilir. Gerekirse 24 saat daha kuluçkada bırakılır.

Negatif Citrobacter laktoz türlerini farklılaştırmak temel olarak yararlıdır. Salmonellas sp.

referanslar

1. Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
4. Laboratuvarlar Britania. Lizin demir ağarı. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
5. BD Laboratuvarları BBL Lisin Demir Agar Slantları. 2007. Erişim: bd.com
6. Valtek Laboratuvarları Orta L.I.A. 2009. Mevcut adres: andinamedica.com