Pay:
Ağar Hektoen Vakfı, hazırlığı ve kullanımları
Hektoen ağarı veya enterik Hektoen agar, katı, seçici ve farklı bir kültür ortamıdır. King ve Metzger tarafından Hektoen Enstitüsünde Shigella ve Salmonella cinslerinin enteropatojenik bakterilerinin izolasyonu için oluşturulmuştur..
Ortam proteoz pepton, maya özütü, safra tuzları, laktoz, sukroz, salisin, sodyum tiyosülfat, sodyum klorür, demir sitrat, amonyum sitrat, bromothymol mavisi, asit fuşsin ve agardan oluşur. Bu formülasyon Shigella ve Salmonella cinsini bu besiyerinde çoğalabilen bakterilerin geri kalanından ayırt etmeyi sağlar.
Hektoen agar ile aynı işleve sahip başka araçlar da bulunsa da, özellikle Shigella türlerini kurtarmak istediğinizde, bu diğer yollarla karşılaştırıldığında daha büyük avantaj sağlar.
Her iki cinsin türü, bulaşmış gıda tüketiminden dolayı insanlarda ciddi gastrointestinal problemler üretir; bu nedenle iletim dışkıdır - sözlü. Bu nedenle Hektoen agarının kullanımı dışkı ve gıda örneklerinin mikrobiyolojik analizinde esas olarak belirtilmiştir..
indeks
- 1 Vakfı
- 2 Hazırlık
- 3 kullanım
- 4 kalite kontrol
- 5 Sınırlamalar
- 6 Kaynakça
vakıf
Hektoen agar, mikrobiyal gelişim için gerekli unsurları sağlayan, besin kaynağı olarak peptonlar ve maya özütleri içerir..
Bununla birlikte, bazı bakterilerin, özellikle Gram pozitif ve bir miktar Gram negatifinin büyümesini engelleyerek etkiyen safra tuzları da vardır. Bu nedenle seçici bir ortam olarak kabul edilir..
Öte yandan, Hektoen agar diferansiyel bir ortamdır. Bu özellik, laktoz, sakkarora ve salisin gibi fermente edilebilir karbonhidratların varlığı ile birlikte, bromotimol mavisi ve asit fuşsin ile temsil edilen pH gösterge sistemi ile sağlanır..
Bu ortamda, Salmonella ve Shigella cinsine ait olmayan tüm bakteriler, Proteus cinsi hariç somon veya turuncu koloniler geliştirir. Bu, pH indikatörünün dönmesine neden olan besiyerini asitleştiren mevcut karbonhidratlardan birinin veya birkaçının fermantasyonundan kaynaklanmaktadır..
Bir kısmı için, Shigella ve Salmonella cinsi, sadece çevreyi alkalize eden ve dolayısıyla kolonileri mavi-yeşil olan bir enerji kaynağı olarak peptonları kullanarak mevcut karbonhidratların hiçbirine fermente edemez.
Ayrıca bu ortamda hidrojen sülfit (renksiz gaz) oluşturabilen ayırt edici bakteriler de bulunabilir. Sodyum tiyosülfat, kükürt kaynağı olarak görev yaparken, demir sitrat açığa çıkaran ajandır. Her iki bileşik de, reaksiyonu kanıtlayan siyah bir demir sülfit çökeltisinin oluşumunu mümkün kılar.
Koloninin ortasındaki saydam bir halo ile siyah çökelti, balık gözü görünümü verir. Bu özellik Salmonella cinsinin varlığını göstermektedir.
Son olarak, sodyum klorür ozmotik dengeyi korur ve agar ortama katı bir tutarlılık kazandırır..
hazırlık
Susuz ortamdan 76 g tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışımı kuvvetlice çalkalayın ve sonra 10 ila 15 dakika dinlendirin. Tamamen çözülene kadar döner hareketler vererek ısıtılabilir ve kaynatılabilir. Bu araç otoklavlanmadı.
Ortam yaklaşık 45 ° C'lik bir sıcaklığa ulaştığında, 20 ml'lik bir hacim doğrudan steril Petri kaplarına dökülür..
Agar katılaşmaya bırakılır. O zaman kullanıma hazırlar. Bunları hemen kullanmanız önerilir. Eğer mümkün değilse, kullanılıncaya kadar buzdolabında tutulmalıdırlar..
Plakalar oda sıcaklığına gelinceye kadar ekimden önce buzdolabından erken çıkarılmalıdır..
Ortamın pH'ı 7.5 ± 0.2 olmalıdır. Susuz ortamın rengi mordur ve hazırlanmış kahverengimsi yeşildir..
kullanım
Dışkı ve yiyecek örneklerinde Shigella ve Salmonella cinsinin bakteri aranması için Hektoen agar kullanılması tavsiye edilir..
Numune daha önce selenit suyu, selenit sistin suyu, tetrationat suyu vb. Gibi özel etkenlerle zenginleştirilirse, bu bakterileri izole etme olasılığı büyük ölçüde artar..
Aşılama kuvvetli olmalı ve tohumlama şerit halinde yapılmalıdır. Plakalar 37 ° C'de 24 ila 48 saat aerobiyozda inkübe edilir.
48 saat kuluçkada bırakılması tavsiye edilir, çünkü kolonilerin özellikleri şu anda yorumlanması ve farklılaşması için daha açıktır.
Kalite kontrol
Bu besiyerinde kalite kontrolünü gerçekleştirmek için, aşağıdaki gibi sertifikalı bakteri suşları kullanılır: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ve Shigella sonnei ATCC 25931.
Beklenen sonuçlar aşağıdaki gibidir: Salmonella typhimurium ve Salmonella enteritidis siyah merkezi olan veya olmayan yeşil-mavi koloniler geliştirmelidirler. Shigella türleri mavi-yeşil koloniler halinde büyürken.
Ayrıca, suşlarını içerebilir Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ve Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Bu durumlarda, gözlenen özellikler aşağıdaki gibidir: E. coli ve K. pneumoniae Bu ortamda, etraflarında aynı renkte bir tortu ile somon-turuncu koloniler geliştirir. Bu arada Proteus, siyah merkezi olan veya olmayan mavi-yeşil koloniler geliştirecek.
iken S. aureus ve E. faecalis bazen inhibe edilmeli E. faecalis sarı koloniler halinde büyümeyi başarır, çok küçük.
Öte yandan, bu ortam bir otoklavda sterilize edilmediğinden, ortamın sterilitesini değerlendirmek önemlidir. Bu nedenle, hazırlanan her parti 37 ° C'de 24 saat boyunca aerobiyozda aşılamadan bir ila iki plakada inkübe edilmelidir.
Tabi ki plaka üzerinde herhangi bir büyüme olmaması bekleniyor..
sınırlamaları
-Proteus türleri bu ortamda gelişebilir ve kolonilerinin özellikleri Salmonella veya Shigella türleri ile karıştırılabilir. Bu nedenle, şüpheli herhangi bir koloninin biyokimyasal testlerle doğrulanması gerekir..
-Bu besiyerinin kullanımına diğer daha az seçici agarlarla eşlik etmek gereklidir, çünkü eğer arayan mikroorganizma düşük konsantrasyonlarda bulunursa, bu bunda gelişmeyebilir.
-Hazırlığı sırasında fazla ısınmayın, çünkü aşırı ısı ortamın bileşimini değiştirir.
-Olağandışı laktoz fermente Salmonella kolonileri fark edilmeden görünebilir.
referanslar
- Wikipedia katılımcıları. Hektoen enterik ağarı. Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 13 Mart 2019, 23:38 UTC. Erişim: .wikipedia.org / Erişim tarihi: March 16, 2019.
- BD Laboratuvarları BD Hektoen Enteric Agar (Yüksek Ağar). 2013. Erişim: bd.com
- Laboratuvarlar Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları. Ağar Hektoen ağar. Mevcut adres: f-soria.es
- Difco ve BBL El Kitabı, Hektoen Enteric Agar. 2. Baskı Mevcut: bd.com/europe