Agar Endo vakfı, hazırlanması ve kullanımı

Endo agar veya ortam Endo, belirli bir seçicilik derecesine sahip katı, diferansiyel bir kültür ortamıdır. Orijinal formül, 1904 yılında Endo tarafından laktoz fermente edici bakterileri fermente edici olmayan bakterilerden ayırmak için yaratılmıştır. Başlangıçta izolasyonu için tasarlanmıştır Salmonella typhi, fakat daha sonra medyanın amacı koliformları aramaya başladı.

Endo agar prensibi korunmuş, ancak formülasyonu yıllar içinde sayısız değişiklik geçirmiştir. Halen, ortam peptitle sindirilmiş hayvan dokusu, laktoz, dipotasyum hidrojen fosfat, sodyum sülfit, bazik fuchsin ve agardan oluşmaktadır..

Ortamın ana kullanımı, Enterobacteriaceae familyasına ve diğer ailelere ait Gram negatif basillerin izolasyonu ve farklılaşması ile bağlantılı olmuştur..

Uzun süre su, süt ürünleri ve gıda örneklerinde koliformların tespitinde kullanılmış, ancak günümüzde bu besiyerinin kullanımı benzer fonksiyonlardan başkalarının yerini almıştır. Bununla birlikte, bazı mikrobiyoloji laboratuvarları bu agarı Enterobacteriaceae'nin klinik kökenli örneklerden izole edilmesi için kullanır..

indeks

• 1 Vakfı
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Endo ağarı
  • 2.2 Agar m-Endo'nun bir çeşidi
• 3 kullanım
• 4 kalite kontrol
• 5 Sınırlamalar
• 6 Kaynakça

vakıf

Endo agar, iddiasız mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan amino asit, azot, karbon ve enerji kaynağı olarak işlev gören peptonları içerir..

Öte yandan, agarın hafif seçici karakteri, sodyum sülfit ve bazik fuşsin; her iki bileşen de çoğu Gram pozitif bakterilerin gelişimini kısmen veya tamamen inhibe eder.

Diferansiyel karakter, bu durumda laktoz ve bazik fuchsin olan fermente edilebilir karbonhidratın varlığı ile verilir;.

Bu agar üzerinde büyüyen ve laktozu mayalayabilen gram negatif bakteriler güçlü pembe koloniler oluşturacaktır; patognomonik olmak Escherichia coli Yeşil metalik parlak yanardöner ile koyu kırmızı kolonilerin oluşumu. Bu, karbonhidrat fermantasyonundan kaynaklanan yüksek asit üretiminden kaynaklanmaktadır..

Kolonilerin etrafındaki ortamın da güçlü bir pembe renge dönüştüğü not edilmelidir. Fermente olmamakla birlikte gram negatif basil laktoz, orta veya renksizlere benzer soluk pembe koloniler oluşturur..

Dipotasyum hidrojen fosfat besiyerinin pH'ını dengeler ve agar katı kıvamı sağlayan bileşendir..

hazırlık

Endo Agar

Susuz ortamın 41.5 gramını tartın ve 1 litre damıtılmış su içinde eritin. Karışımı, ortamın tamamen çözülene kadar sık ​​sık karıştırarak ısıtın. Otoklavda 121 ° C'de 15 lb basınçta 15 dakika sterilize edin.

Otoklavdan çıkarırken, yaklaşık 45-50 ° C'lik bir sıcaklığa soğumaya bırakın, servis yapmadan önce homojenize etmek için karışımı çalkalayın. Steril Petri kaplarına 20 ml dökün.

Tabakların katılaşmasını, ters çevrilmesini ve bir kutuda saklanmasını veya buzdolabında saklanmadan önce koyu kağıtla sarılmasını sağlayın. Hazırlanan besiyerini doğrudan ışıktan korumak çok önemlidir. Önerilen bir uygulama, ihtiyaç duyulacak tam miktarı hazırlamaktır..

Buzdolabında saklanırsa, kullanmadan önce plakalar temperlenmelidir..

Ortamın pH'ı 7.2 ila 7.6 arasında olmalıdır ve hazırlanan ortamın rengi soluk pembedir..

Değişken ağar m-Endo

Endo agar (m-Endo) 'nun, McCarthy, Delaney ve Grasso formülünü izleyen, hazırlanma biçiminde daha fazla bileşik içeren ve değişkenlik gösteren başka bir sürümü daha vardır..

Bu değişken şunları içerir: laktoz, triptoz, kazeinin enzimatik sindirimi, hayvan dokusunun enzimatik sindirimi, sodyum klorür, dibazik potasyum fosfat, sodyum sülfit, maya özütü, potasyum fosfat monobazik, bazik fuchsin, sodyum deoksikolat, loril sülfat sodyum ve ağar.

Bu durumda, 51 g susuz ortam tartılır ve 20 ml etanol içeren 1 litre damıtılmış su içinde süspansiyon haline getirilir.

Ortam tamamen çözülene kadar karıştırırken hafifçe ısıtın. Aşırı ısınmayın ve otoklavda sterilize etmeyin. Karışım homojen hale geldiğinde, steril petri kaplarında servis yapın ve katılaşmaya bırakın.

kullanım

Bazı ülkelerde su ve gıda örneklerinde toplam ve fekal koliformların sayılmasında, özellikle Escherichia coli dışkı kontaminasyonunun ana göstergesi olarak.

M-Endo agar, Amerikan Halk Sağlığı Birliği (APHA) tarafından dezenfeksiyon ve atık su arıtma programlarının izlenmesi ve kontrolünün yanı sıra içme suyu kalitesinin değerlendirilmesinde önerilmektedir..

En çok kullanılan yöntem, numunenin Lauril sülfat suyu ile 2 ila 4 saat zenginleştirilmesinden sonra membran filtrasyonudur..

Ayrıca, EMB agar yerine, gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde, en muhtemel sayı tekniği (NMP) ile, özellikle de varlığını doğrulamak için tam olarak doğrulayıcı aşamada kullanılabilir. E. coli bulanık EC çorbalarından.

Kalite kontrol

Hazırlanan Endo agar partisinin kalitesini değerlendirmek için bilinen veya sertifikalı kontrol türleri ekilir.

Bu amaçla kullanılabilecek suşlar arasında: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 ve Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Suşlar tükenme ile ekilir ve 37 ° C'de 24 saat aerobiyozda inkübe edilir.

Beklenen sonuçlar:

• için Escherichia coli: metalik parlaklık ile güçlü kırmızı koloniler.
• için E. cloacae ve K. pneumoniae koloniler pembe mukozit olmalıdır.
• S durumunda. Typhimurium, S. flexneri ve P. mirabilis koloniler genellikle soluk pembe veya renksizdir.
• nihayet, E. faecalis kısmen engellenmesi beklenir, bu nedenle büyümesinin zayıf pembe kolonilerden dolayı zayıf olması gerekir..

sınırlamaları

-Endo besiyerinin düşük seçici gücü vardır, bu nedenle Staphylococcus, Enterococcus ve hatta mayalar gibi bazı Gram pozitif mikroorganizmaların büyümesi mümkündür..

-Enterobacteriaceae familyasına ait olmayan diğer basiller bu ortamda örneğin Pseudomonas sp ve Aeromonas sp. Bu suşların özellikleri renksiz düzensiz kolonilerdir.

-Hazırlanan bu ortam ışığa karşı çok hassastır, bu nedenle, uzun süre maruz kalması gösterge sistemini kötüleştirir, ortama geri dönüşümsüz zarar verir.

-Ortamın bileşenleri kanserojen olarak kabul edilir, bu nedenle doğrudan temastan kaçınılmalıdır.

-Susuz ortam çok higroskopiktir ve orjinal kabında oda sıcaklığında, sıkıca kapalı ve kuru bir ortamda muhafaza edilmelidir..

referanslar

1. BD Laboratuvarları Endo Agar. 2013. Erişim: bd.com
2. Neogen Laboratuvarları M Endo Agar. Erişim: foodsafety.neogen.com
3. "Agar Endo." Vikipedi, özgür ansiklopedi. 7 Eyl 2017, 08:27 UTC. 28 Şubat 2019, 22:55. Mevcut: en.wikipedia.
4. MercK laboratuvarı. Endo agar 2019. Uygun fiyat: merckmillipore.com
5. Laboratuvarlar Teknik Sayfası. M-Endo Agar LES. 2015. Erişim: liofilchem.net