Agar EMB kuruluş, hazırlık ve kullanım



EMB ağarı Gram negatif basillerin, özellikle Enterobacteriaceae familyasının ve diğer talepkar olmayan Gram negatif basillerin izolasyonu için kullanılan seçici ve diferansiyel bir katı kültür ortamıdır. Aynı zamanda eozin-metilen mavisi anlamına gelen EAM kısaltması ile de bilinir..

Bu ortam 1916'da Holt-Harris ve Teague tarafından yaratılmıştır. Pepton, laktoz, sakaroz, dipotasyum fosfat, ağar, eozin, metilen mavisi ve su içerir. MacConkey agarına çok benzer, özellikle sukroz içermeyen Levine tarafından modifiye edilmiş EMB agar kullanıyorsanız,.

Aslında, her bir laboratuvar, biyokimyasal olarak farklı olmasına rağmen, aynı işlevi yerine getirdikleri için, biri veya diğeri ile çalışıp çalışmadığına karar verir..

Proteus cinsinden kaynaşma üretimi açısından klasik MacConkey agar ile aynı dezavantajı bile sunmaktadır. Bu nedenle, bu fenomenden kaçınmak için agar konsantrasyonunu% 5'e kadar artırabilirsiniz..

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 Seçici
    • 1.2 Diferansiyel
  • 2 Hazırlık
  • 3 Kullanım
  • 4 kalite kontrol
  • 5 Nihai düşünceler
  • 6 Kaynakça

vakıf

selektif

EMB agarı, seçici olarak seçicidir çünkü çoğu Gram-pozitif bakterinin ve bazı Gram-negatif basillerin çoğalmasını önleyen, önleyici olarak işlev gören anilinik boyaları (eozin ve metilen mavisi) içerir..

Bununla birlikte, bu agar, bazı Gram-pozitif bakterilerin, inhibe edici maddelerin varlığına direnç gösterebileceği ve küçük renksiz punktiform koloniler gibi büyümesi dezavantajına sahiptir. Enterococcus faecalis ve bazı stafilokok.

Ayrıca bazı mayaları da yetiştirebilirsiniz. Candida albicans kompleksi, Çok küçük pembe koloniler verecektir. Numune derinlikte ekilirse, bu mayadan bile klamidosporlar geliştirilebilir..

diferansiyel

Öte yandan, EMB agar aynı zamanda farklı bir ortamdır, çünkü bu boyalar bir arada (eozin ve metilen mavisi) asidik pH'da bir çökelti oluşturma özelliğine sahiptir, bu nedenle bunların üretiminin bir göstergesi olarak kullanılırlar..

Bu nedenle, zayıf fermente laktoz veya sukroz bakterileri 24 ila 48 saat içinde mor koloniler oluşturur. Örneğin, Klebsiella, Enterobacter ve Serratia cinsleri.

Gibi laktoz fermente eden bakteriler, örneğin Escherichia coli, veya sukroz, olduğu gibi Yersinia enterocolitica veya Proteus penneri, yeşilimsi siyah bir çökelti oluşturur, bu türlerde metalik parlaklık verir.

EMB levine besiyeri kullanılırsa (sukroz olmadan) belirtilmelidir., Yersinia enterocolitica ve Proteus penneri şeffaf koloniler üretecekler.

Laktoz veya sakaroz fermente etmeyen bakteriler, bakteriyel gelişim için gerekli olan amino asitleri ve azotu sağlayan ve saydam koloniler üreten peptonların varlığı ile beslenir. Örneğin, Salmonella ve Shigella cinsleri, diğerleri arasında.

Aynı şekilde, Acinetobacter cinsinin laktoz fermentörü olmasa da sakaroz lavanta kolonileri sunabileceğini, ancak hücre duvarında metilen mavisini sabitleme özelliğine sahip olduğunu not etmek önemlidir. Bu diğer oksidatif bakterilerde de olabilir..

hazırlık

Orijinal susuz ortam açık bej.

Bu kültür ortamını hazırlamak için, 36 gram susuz ortam, tartılmalı ve bir litre damıtılmış su içeren bir şişe içinde süspansiyon haline getirilmelidir..

Karışımı 5 dakika dinlendirdikten sonra fiolaları bir ısı kaynağına getirin, kaynayana ve tamamen eriyene kadar kuvvetlice ve sürekli karıştırın..

Daha sonra, çözünmüş kültür ortamı, otoklav kullanılarak 121 ° C'de 15 dakika süreyle sterilize edilmelidir.

Sürenin sonunda, otoklavdan çıkarılır ve kısa bir süre dinlenmeye bırakılır. Daha sonra her steril petri kabında 15 ila 20 ml agar arasında bile sıcak (45 - 50 ° C) servis edilir. Orta mavi litmus olmalı.

Servisten sonra plakalar biraz soğuyana kadar hafifçe açığa çıkarılır. Sonra kaplanır ve tamamen katılaşmaya bırakılır. Daha sonra, ters bir plak tutucu içinde sipariş edilirler ve kullanılana kadar buzdolabında (8 ° C) saklanırlar..

Bu prosedür tercihen kirlenmeyi önlemek için laminer akış kaputu veya Bunsen brülörünün önünde yapılır..

Her ticari evin kültür ortamını hazırlamak için tartılacak miktarı göstereceğini akılda tutmak önemlidir..

Ortamın nihai pH değeri 7.2 ± 0.2 olmalıdır

uygulamaları

Bu besiyeri idrar ve dışkı veya herhangi bir klinik numunenin ekilmesi için kullanılır, özellikle bu besiyerinde çok iyi yetişen Enterobacteriaceae familyasına ait olan bacalar gibi, talepkar olmayan Gram negatif basillerden şüphelenilirse.

Shigella ve Salmonella cinslerinin enteropatojenik bakterileri renksiz veya hafif amber renkli kolonileri ile ayırt edilir..

Diğer fermente olmayan laktoz basilleri, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter gibi, diğerleri arasında da büyür..

Benzer şekilde, bu besiyeri gıda ve suyun mikrobiyolojik analizinde çok kullanışlıdır, çünkü koliformların belirlenmesinin tam doğrulayıcı aşaması için, yani, mevcudiyetini doğrulamak için idealdir. E. coli bulanık EC çorbalarından, en muhtemel sayı tekniğinden (NMP).

Kalite kontrol

Yeni ekili kültür ortamının iyi çalıştığını doğrulamak için, kolonilerin özelliklerini gözlemlemek ve beklendiği gibi verdiklerini doğrulamak için kontrol suşları yerleştirilebilir..

Bunun için ATCC suşları veya iyi tanımlanmış suşları E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa ve bazı Gram pozitif bakteriler S. aureus.

Bu bekleniyor E. coli Yeşil metalik parlaklık ile iyi gelişmiş mavimsi siyah koloniler oluşturun. Sürece, Enterobacter aerogenes ve Klebsiella sp iyi gelişmiş mukoza kolonileri mavimsi siyah vermelidirler.

Onun parçası için, zehirlenmeye neden olan mikrop typhimurium ve Shigella flexneri, renksiz veya hafif kehribar rengi olan büyük koloniler geliştirmelidirler.

Sonunda tür Pseudomonas aeruginosa düzensiz büyüklükte renksiz koloniler olarak büyür, oysa Gram-pozitif bakteriler tamamen inhibe edilmeli veya çok küçük kolonilerde az miktarda büyümelidir..

Son düşünceler

Bazen sterilizasyon, turuncu bir ortamı gözlemleyerek metilen mavisinin azalmasına neden olur. Metilen mavisinin oksitlenmesi ve mor rengin geri kazanması için renk iyileşene kadar hafifçe karıştırılmalıdır..

Ayrıca, sterilizasyon boyayı çökeltebildikten sonra, Petri kaplarına servis yapmadan önce iyice karıştırılmalıdır..

referanslar

  1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. 2009. Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi için Teknikler. 2. baskı UNAM Kimya Fakültesi. Meksika.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Suşlarının Karakterizasyonu ve Dağılımı Escherichia coli Peru'daki Tavukçuluk Çiftliklerinden Tavuk Broylerinin Patojenik İzolatları. Rev. araştırması. veteriner. Peru 2012 23 (2): 209-219. Erişim: scielo.org.
  3. Laboratuvarlar Conda S.A. Eosin Agar ve Metilen Mavisi. 2010. Mevcut adres: condalab.com
  4. Laboratuvarlar Britania. Levine E.M.B (Eosin ve Metilen Mavisi ile) 2011. Uygun fiyat: britanialab.com
  5. BD Laboratuvarları BD EMB Agar (Eosin Metilen Mavisi Agar), Modifiye edilmiştir. 2013. Erişim: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı (5. basım). Arjantin, Editör Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott'un Mikrobiyolojik Tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden