Ağar standart temeli, hazırlığı ve kullanımına sahiptir

standart hesap ağarı diğer yiyeceklerin yanı sıra içme suyu, atık su, sütlü içecek numunelerinde bulunan aerobik mikrobiyal yükün miktarının belirlenmesi için tasarlanmış, katı, seçici olmayan bir kültür ortamıdır. Bu ortam ayrıca, English Plate Count Agar'daki kısaltması nedeniyle PCA agar olarak da bilinir. 1953 yılında Buchbinder, Baris ve Goldstein tarafından yaratılmıştır..

Standart agar besiyeri hesabı maya ekstraktı, triptein, glikoz, agar ve damıtılmış sudan oluşur. Bu formülasyon talepkar olmayan mevcut aerobik mikrobiyal yükün gelişmesine izin veren temel besin elementlerini içerir.

Ortam inhibitör içermediğinden, bakteriler herhangi bir sınırlama olmadan gelişebilir, bu nedenle genel koloni sayımı için idealdir. Bununla birlikte, plaka miktar belirleme tekniği mevcut tüm bakterileri tespit etmeyecek, ancak yalnızca standart ekim agarının maruz kaldığı çevresel koşullar altında yetişebilecek olanları tespit edecektir..

Bu anlamda, plaka niceleme tekniği, genel olarak, aerobik mezofilik tip bakteri, yani, 25 ila 40 ° C arasındaki sıcaklıklarda, 37 ° C'de optimum bir büyüme sıcaklığı ile gelişenlerin miktarını belirlemeye çalışır..

Bu bakteri grubu çok önemlidir, çünkü insanlar için patojenik bakteri çoğu vardır..

Bazen yiyeceklerde bulunan psişrofilik bakteri miktarını ölçmenin ilginç olabileceği belirtilmelidir. Bu bakteri düşük sıcaklıklarda gelişen< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Aynı şekilde, 50 ° C ila 80 ° C arasında değişen termofilik bakteriler, konserve gibi bazı yiyecek türlerinde önemli olabilir..

Mikrobiyal miktar tayini, gram veya numune mililitresi başına koloni oluşturan birimlerde (CFU) ifade edilir..

indeks

• 1 Vakfı
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Levha dökün tekniği için
  • 2.2 Yüzey dikimi için
• 3 kullanım
  • 3.1 Levha dökme tekniği (derinlik ekilmiş)
  • 3.2 Yüzeye ekilen teknik
• 4 kalite kontrol
• 5 Sınırlamalar
• 6 Kaynakça

vakıf

Standart sayma ortamı, talep edilmeyen aerobik bakterilerin tatmin edici bir şekilde gelişmesine izin verecek şekilde tasarlanmıştır, çünkü maya özütü, üçlü ve glikoz, iyi bir mikrobiyal gelişme için gerekli besinleri sağlar..

Öte yandan, besiyeri açık bir renge ve saydam bir görünüme sahiptir, bu nedenle derin ekim yöntemiyle geliştirilen (kolona dökerek) kolonileri göstermek için idealdir..

Drigalski spatulasıyla yüzeyde ekim yöntemiyle kolonileri saymak da mümkündür..

Mikrobiyal yük yüksek olduğunda, CFU'ları saymak için inceleme altındaki numunenin ondalık dilüsyonları yapılmalıdır..

Bu ortamın, Amerikan Halk Sağlığı Birliği (APHA) tarafından aerobik mezofillerin sayımı için önerildiğine dikkat edilmelidir..

hazırlık

23.5 gr susuz ortamın tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışımın tamamen çözünmesi için karışım kaynayana kadar sık ​​sık karıştırılarak ısıtılmalıdır. Alt-takip eden adımlar, kullanılacak tohumlama tekniğine bağlıdır..

Plaka dökün tekniği için

Test tüplerine 12 ila 15 ml dağıtarak dağıtın. Daha sonra, otoklavda 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edin. Bir blok şeklinde dikey olarak katılaşmaya izin verin. Kullanana kadar buzdolabında saklayın.

Kullanılacak olan ipucunu eritin. Eridikten sonra, numuneler hazırlanırken 44-47 ° C'de bir su banyosunda tutun.

Yüzeyde dikim için

Ortamı 121 ° C'de bir otoklavda sterilize edin ve daha sonra steril petri kaplarına 20 ml dağıtın. Sertleşmesine, tersine çevrilmesine ve kullanana kadar buzdolabında saklanmasına izin verin.

Kullanmadan önce plakaları temperleyin. Ortamın pH'ı 7,0 ± 0,2 olmalıdır.

kullanım

Agar standart sayımı, su ve yiyeceğin mikrobiyolojik analizi sırasında aerobik mezofil sayma tekniğinde kullanılır. İncelenen örneğin sıhhi kalitesini belirlediği için aerobik mezofillerin sayımı gereklidir..

Bu tekniğin uygulanması (bu besiyerinin kullanılması) izole edilmiş kolonilerin mikroskobik olarak makroskobik olarak görüntülenmesini sağlar.

Plak dökme tekniği (derinlemesine ekilmiş)

-süreç

Teknik aşağıdakilerden oluşur:

1) Mevcut bakterileri yeniden dağıtmak için numuneyi homojenize edin.

2) 90 ml seyreltici (10) içindeki 10 g veya 10 ml numune oranına bağlı olarak steril bir şişe veya torba içinde bir ilk süspansiyon gerçekleştirilir (10).^-1).

3) İlk süspansiyondan, numunenin türüne bağlı olarak ilgili ondalık dilüsyonlar yapılır. Ör: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Seyreltmeler pepton suyu veya fosfat tamponu ile yapılır.

Bunu yapmak için, ilk süspansiyondan 1 ml alın ve 9 ml seyrelticiye yerleştirin, gerekirse 1 ml seyreltme alarak, seyreltmeleri devam ettirin.^-2 ve benzeri.

4) Her dilüsyondan 1 ml alın ve boş steril Petri kaplarına yerleştirin.

5) Her bir plakaya 12 ila 15 ml daha önce eritilmiş ve 44 - 47 ° C'ye ayarlanmış standart sayım agar ekleyin.

6) Örneği agara eşit bir şekilde dağıtmak ve katılaşmaya izin vermek için plakalara düzgün döner hareketler verin.

7) Plakları ters çevirin ve 37 ° C'de aerobiyozda 24 ila 48 saat inkübe edin.

8) Süre bittiğinde, plakaları incelemeye devam edin ve izin veren dilüsyondaki kolonileri sayın. 30 - 300 CFU arası olan plakaları saymak için seçilir.

Sayma manuel olarak yapılabilir veya koloni sayacı ekipmanı kullanılabilir.

Bir ml numune için izin verilen değerler, yönetildikleri standartlara göre bir ülkeden diğerine değişebilir.

-UFC'nin hesaplanması

Genel hesaplama aşağıdaki formül kullanılarak yapılır:

Sonuçları, uygun taban 10 ile çarparak, 1 veya 2 basamakta ifade edin. Örnek: sonuç 16.545 ise, üçüncü haneye göre 17.000'e yuvarlanır ve aşağıdaki gibi ifade edilir: 1.7 x 10⁴. Şimdi, sonuç 16,436 ise 16,000'e yuvarlanır ve 1,6 x 10 ifade edilir⁴.

Yüzeyde ekili teknik

-süreç

-Sıvı ise doğrudan numune 0.1 ml inoküle edin, ilk süspansiyon 10^-1 veya ardışık dilüsyonlar 10^-2, 10^-3 vb standart hesap agar plaka ortasında.

-Örneği Drigalski spatula veya L şeklinde cam çubukla eşit şekilde dağıtın, 10 dakika bekletin.

-Plakları ters çevirin ve aerobiyozda 37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin.

-Kolonileri saymaya devam edin, 20 - 250 CFU aralığında olan plakaları seçin.

-UFC'nin hesaplanması

Hesaplama için, tersi olan dilüsyon faktörü uygulanır. Sayı 2 önemli basamağa yuvarlanır (üçüncü basamağa göre yuvarlama) ve taban 10 gücünde ifade edilir Örneğin, seyreltilmeden örnekte 224 CFU sayılırsa (10^-1), 22 x 10 bildirildi¹  UFC, ancak rakam 225 olsaydı 23 x 10 bildirilir¹ UFC.

Şimdi, seyreltme sırasında 199 CFU’yu sayıyorsanız 10^-3, 20 x 10 rapor edilecektir⁴ UFC, ancak aynı seyreltmede 153 CFU sayılırsa, 15 x 10 bildirilecektir⁴ UFC.

Kalite kontrol

Standart sayım kültür ortamı, aşağıdakiler gibi bilinen sertifikalı suşlar kullanılarak değerlendirilebilir: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Kültür ortamı uygun koşullarda ise, tüm durumlar dışında tatminkar bir büyüme beklenir. L. fermentum düzenli bir performansa sahip olabilir.

Kültür ortamının sterilitesini değerlendirmek için hazırlanan her partiden bir veya iki plaka (aşılanmamış) aerobiyozda 24 saat 37 ° C'de inkübe edilmelidir. Bu sürenin sonunda besiyerinde hiçbir büyüme veya renk değişikliği gözlemlenmemelidir..

sınırlamaları

-Agarı bir kereden fazla eritmeyin.

-Hazırlanan ortam, buzdolabında saklandığı ve ışıktan korunduğu sürece 3 aya kadar sürebilir.

-Bu ortam zorlu mikroorganizmalara ve anaeroblara uygun değildir.

referanslar

1. Ulusal İlaç Gıda ve Tıbbi Teknolojisi İdaresi (ANMAT). Gıdaların mikrobiyolojik analizi, resmi analitik metodoloji, indikatör mikroorganizmalar. 2014 Cilt 3. Elde edilebilir: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları, S.A. Plaka Sayısı Agar. 2009. Şurada mevcuttur: http://f-soria.es
3. Laboratuvarlar Conda Pronadisa. APHA ve ISO 4833'e göre standart yöntemler için (PCA) Agar.
4. Laboratuvarlar Britania. Agar plakasında sayma. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. 2009. Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi için Teknikler. 2. baskı UNAM Kimya Fakültesi. Meksika. Mevcut adres: depa.fquim.unam