Agar CLED Vakfı, kullanımları ve hazırlanması



CLED ağarı (Sistin-Laktoz-Elektrolitler-Eksik), idrar yolu enfeksiyonlarının teşhisinde kullanılan bir diferansiyel katı kültür ortamıdır. Kültür ortamının bileşimi idrar patojenlerinin iyi büyümesi için tasarlanmıştır ve koloni oluşturan birimlerin (CFU) miktarının belirlenmesi için idealdir..

CLED kültür ortamı seçici değildir, çünkü Gram negatif ve ayrıca Gram pozitif mikroorganizmalar içinde büyüyebilir. Fakat bu bir problem değildir, çünkü idrar yolu enfeksiyonlarının çoğu tek tip bir mikroorganizma kaynaklı olabilir..

Polimikrobiyal enfeksiyonlarda 2 veya 3 farklı bakteri elde edilebilir, ancak çok nadir görülür ve çoğu zaman kontamine olmuş numunelerdir..

Bu ortamda büyüyebilecek Gram negatif bakteriler arasında aileye ait basiller bulunur Enterobacteriaceae ve diğer enterik basillerde, üropatojenler idrar numunelerinde en sık izole edilir: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, diğerleri arasında.

Aynı şekilde, bu ortamda büyüyebilecek Gram pozitif bakteriler arasında Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp ve kompleksler gibi maya da yetiştirebilirler Candida albicans.

Bununla birlikte, besiyerinin kimyasal bileşimi nedeniyle, bu gibi bazı zorlu genitoüriner patojenlerin büyümesine izin vermez Neisseria gonorrhoeae, gardnerella vaginalis'e, diğerleri arasında.

indeks

  • CLED agar 1 Vakfı
  • 2 CLED ağarının kuruluşu (Bevis)
  • 3 Kullanım
    • 3.1 Ekim idrar örnekleri
    • 3.2 Yorumlama
    • 3.3 Tanımlama
  • 4 Hazırlık
  • 5 Kaynakça

CLED ağarının kuruluşu

CLED kültür ortamı, bir enerji kaynağı et özü, kazein pankreas hidrolizatı ve jelatin hidrolizatı olarak bulunur. Bu iddiasız bakteri gelişimi için besin sağlar.

Ayrıca, küçük boyutu ile ayırt edilebilen koliformların büyümesini sağlayan bir amino asit olan sistin içerir..

Aynı şekilde, laktoz fermente edilebilir karbonhidrat içerir, bu nedenle bu besiyeri farklıdır; Fermente edici bakterileri fermente olmayan laktozdan ayırt edebilme.

Fermente edici bakteriler, ortamın pH'ını asit üreterek, sarı koloniler geliştirerek dönüştürürken, fermente edici olmayan bakteriler ortamda değişiklik üretmez, bu nedenle orijinal agar, yeşil rengin renklenmesini alırlar.

Fermantasyon reaksiyonu, bu bromyumol mavisi olan pH indikatörü sayesinde ortaya çıkar..

Öte yandan, ortamın düşük elektrolit konsantrasyonu, cinsin tipik istilacı büyümesini engeller. değişen şey, kaynama etkisi denir. Bu, diğer araçlara göre bir avantaj sağlar, çünkü Proteus cinsinin mevcut olup olmadığı da dahil olmak üzere UFC'lerin sayılmasına izin verir..

Bununla birlikte, düşük elektrolit konsantrasyonu, cinsin bazı türlerinin büyümesini engeller Shigella, diğer araçlara göre dezavantaj olma.

CLED ağarının temeli (Bevis)

Orijinal fuşsin asit bileşimini (Andrade göstergesi) orijinal bileşime dahil eden Bevis tarafından yapılan bu besiyerinin bir varyantı veya modifikasyonu vardır. Fermente edilmeyen bakterilerden fermente edilmesini ayırt etmek için bromothymol blue ile birlikte hareket eder..

Geleneksel ve modifiye edilmiş ortam arasındaki fark, koloniler tarafından kabul edilen renktir. Laktoz fermente edici bakteriler söz konusu olduğunda koloniler, pembe veya kırmızı bir halo ile kırmızımsı turuncu bir renk elde ederken fermente edilmeyenler mavimsi gridir..

uygulamaları

CLED agar, sadece idrar numunelerinin ekimi için kullanılır. Bu besiyerinin kullanımı özellikle Avrupa laboratuvarlarında sıktır, Amerika'da ise daha az kullanılır..

Numunenin toplanması, aşağıdakiler de dahil olmak üzere güvenilir sonuçlar elde etmek için bazı parametreleri karşılamalıdır:

  • Numune almadan önce antibiyotik almamak.
  • Tercihen, idrarın sabahın ilk saatinden alın, çünkü daha konsantre olduğundan, istilacı yöntemlerle numune alınması mümkün olmadığında.
  • Örnek almadan önce cinsel organları iyice yıkayın..
  • İlk işeme akışını atın ve ardından kabı yerleştirin.
  • Steril etiketli kaplarda 25 ila 30 ml idrar toplayın.
  • Hemen buzla çevrili laboratuvara götürün..
  • 2 saat yayılmadan önce işlenmeli veya en fazla 24 saat boyunca 4 ° C'de soğutulmalıdır.

Ekim idrar örnekleri

İdrar örneği 1: 50 oranında seyreltilmelidir..

Seyreltme için, 0.5 ml hastanın idrarını yerleştirin ve 24.5 ml steril fizyolojik çözelti ile seyreltin.

Seyreltilmiş idrarın 0.1 ml'sini ölçün ve CLED besiyerinde drigalski spatula ile yüzey başına ekin. Bu, kolonileri saymak için belirtilen tohumlama yöntemidir. Sonuçların CFU / ml cinsinden ifade edilmesi gerektiğinden idrar örneklerinde kullanılmasının nedeni budur..

Elde edilen kolonilerin ölçümü için, aşağıdakileri uygulayın: plakanın kolonilerini sayın ve 10 ile daha sonra 50 ile çarpın. Bu şekilde, CFU / ml idrar miktarını elde edersiniz..

yorumlama

100.000 CFU / ml'nin üzerinde sayma - İndica üriner enfeksiyon

1000 CFU / ml'nin altında sayma - Enfeksiyon yok

1000-10,000 CFU / ml arasında sayma - Şüpheli, olası kirlilik, numune alımını tekrarlayın.

kimlik

CLED agarı üzerinde yetiştirilen koloniler Gram yapılmalı ve mikroorganizmanın morfotip özelliklerine bağlı olarak belirli bir alt kültür gerçekleştirilir..

Örneğin, eğer bir Gram negatif basil ise, bir MacConkey agarına ekilir, burada laktozun fermantasyonunun veya fermantasyonunun doğrulandığı. Ek olarak, oksidaz testini gerçekleştirmek için besleyici bir agar bağlanmıştır..

Gram pozitif cocci'yi açığa çıkarırsa, tuzlu mannitol agarı ve besleyici agarı içinde alt kültürlenebilir. Sonuncusunda, katalaz testi yapılır. Son olarak, eğer mayalar gözlenirse, bir Sabouraud agarı ekilir.

Birçok laboratuvar CLED besiyerinin kullanımını engeller ve idrar numunelerini ekmek için sadece kanlı agar, MacConkey ve besleyici agar kullanmayı tercih eder..

hazırlık

Bir litre distile su içeren bir şişede, 36.2 gr toz CLED agarı çözündürülür. 5 dakika dinlendikten sonra, yeniden süspanse edilmiş agarı ısıtın, 1 dakika boyunca kaynayana kadar sürekli karıştırın.

Daha sonra otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Süre sona erdiğinde, otoklavdan çıkarılır ve 45 ° C sıcaklığa ulaşana kadar soğumaya bırakılır. Daha sonra her steril Petri kabında 15 - 20 ml arasında servis edilir..

Plakalara servis işlemi, kirlenmeyi önlemek için laminer akış kaputu içinde veya Bunsen brülörünün önünde yapılmalıdır..

Servis edilen plakaların katılaşmasına izin verilir, ters çevrilmiş bir plaka tutucuda sipariş edilir ve kullanılana kadar buzdolabında (2-8 ° C) saklanır.

Hazırlanan ortamın son pH değeri 7.3 ± 0.2 olmalıdır.

referanslar

  1. İdrar yolu enfeksiyonunun mikrobiyolojik tanısı için öneriler. chil. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Erişim: scielo.org.
  2. Panchi J. Mesane kateterizasyonu yapılan iç hastalarda idrar enfeksiyonlarına neden olan mikrobiyal ajanın tanımlanması. 2016. Klinik Laboratuarda Lisans unvanına başvurmak için lisans çalışması. Ambato Teknik Üniversitesi. Ekvador.
  3. Laboratuvarlar Britania. Yarı CLED. Erişim: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratuvarları Kullanma talimatı, CLED Agar. 2013 www.renylab.ind.br adresinde mevcuttur..
  5. Kültür Laboratuarları Mikrobiyolojinin temel el kitabı. Şuradan erişilebilir: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. İdrar kültürü rutininde CLED agar seçeneği. Prospektif ve karşılaştırmalı bir değerlendirme. Teşhis Microbiol Enfeksiyon Hastalıkları 1992; 15 (4): 287 - 90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Servisi.