Simmons sitrat agar vakfı, hazırlanması ve kullanımı



Simmons Citrate agar Mikroorganizmaları, özellikle Gram-negatif basilleri tanımlamak için biyokimyasal bir test olarak kullanılan katı bir ortamdır. Orijinal medya 1923'te Koser tarafından yaratıldı.

Koser's Citrate besiyeri, sodyum fosfat, amonyum fosfat, monopotasyum fosfat, magnezyum sülfat ve sodyum sitrat içeren bir et suyu içerir..

Görülebildiği gibi, ortamdaki tek karbon kaynağı sitrattır ve azot amonyum fosfattır, proteinler ve karbonhidratlar bu elemanların kaynağı olarak çıkarılır, bunlar genellikle diğer ortamlarda bulunur..

Bu nedenle, bu besiyerinde aşılanan bakteri ancak sitrat karbonunu alabiliyorsa çoğalabilir. Ortamda bulanıklık varsa, test pozitifti, ancak spesifik olmayan bulanıklığın ortaya çıkabilmesi dezavantajına sahipti..

Bu problem, Simmons'ın Koser'ın orijinal formülüne agar ve bromothymol mavisi eklemesiyle çözüldü. Her ne kadar prensip aynı olsa da, farklı şekilde yorumlanır..

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 Tohumlama modu
    • 1.2 Yorumlama
  • 2 Hazırlık
  • 3 kullanım
  • 4 Son düşünceler
    • 4.1 Aşı
    • 4.2 Tohumlu
    • 4.3 Renk yoğunluğu
  • 5 Kaynakça

vakıf

Bazı bakteriler, fermantasyon veya laktik asit üretimi olmadığında, diğer substratların kullanımı yoluyla enerji almaya ihtiyaç duymadan hayatta kalma yeteneğine sahiptir. Bu testte sunulan tek karbon kaynağı sitrattır.

Bu koşullar altında hayatta kalabilen bakteriler, trikarboksilik asit döngüsü veya sitrat fermantasyon döngüsü kullanılarak, geleneksel rotaya bir alternatif aracılığıyla sitratı hızlı bir şekilde metabolize eder.

Sitratın bakteriler tarafından katabolizması, koenzim A'nın müdahalesi olmadan enzimatik bir mekanizma içerir. Bu enzim, sitrikaz (sitrat oksaloasetat-liyaz) veya sitrat desmolaz olarak bilinir. Reaksiyon, bu durumda magnezyum tarafından tedarik edilen iki değerli bir katyonun varlığını gerektirir..

Reaksiyon, oksaloasetat ve piruvat üretir, bu daha sonra azot kaynağının kullanımıyla oluşan bir alkalin pH'ın ortasındaki organik asitlere yol açar. Bu organik asitler, besiyeri daha da alkalileştiren karbonatlar ve bikarbonatlar üreten bir karbon kaynağı olarak kullanılır..

Ekim modu

Simmons sitrat ortamı, düz ilmek veya iğne kullanılarak balık kuyruğuna hafifçe inoküle edilmeli ve 24 saat boyunca 35-37 ° C'de inkübe edilmelidir. Zamanın sonunda sonuçlar gözlenir.

Tohumlama sadece agarın yüzeyinde yapılır. Delinme yapmayın.

yorumlama

Ortam orijinal rengindeyse (yeşil) ve gözle görülür bir büyüme yoksa, test negatiftir, ancak ortam maviye dönerse, pH göstergesi tarafından tespit edilen alkali ürünlerin varlığını gösterir. Bu durumda test pozitif.

Bu, eğer bakteri sitratın karbonunu kullanıyorsa, bununla birlikte, amonyağı serbest bıraktığı amonyum fosfatın azotunu alıp ortama alkalileştirir..

Öte yandan, eğer bakterilerin çoğalması ortada gözlenirse, ancak renkte bir değişiklik yoksa, testin de pozitif olduğu düşünülmelidir, çünkü eğer büyüme varsa bakterilerin bir karbon kaynağı olarak sitrat kullanabildiği anlamına gelir, Şu anda bir pH değişikliği olmamasına rağmen (bazen alabilir).

Nihai rengin yorumlanmasında şüphe varsa, aşılanmamış sitrat tüpü ile karşılaştırılabilir..

hazırlık

Bir litre su için 24.2 gr susuz ortamdan tartılır. Karıştırın ve yaklaşık 5 dakika bekletin. Sık sık karıştırarak, ortamın 1 veya iki dakika ısıtılmasıyla çözülmesini tamamlayın.

Test tüplerinde 4 ml servis yapın ve 121 ° C'de 15 dakika otoklavlayın. Otoklavdan ayrılırken, bir destek yardımıyla, ağar az miktarda koç veya alt ve daha fazla eğim ile bir flüt tepe şeklinde katılaşacak şekilde eğin.

Sitrat ortamının nihai pH'ı 6.9'dur (yeşil). Bu ortam pH değişimine karşı çok hassastır.

PH 6 veya altında, ortam sarıya döner. Bu renk bakteri içeren testlerde gözlenmez.

Ve pH 7.6 ya da üstünde, ortam yoğun Prusya mavisine dönüşür.

kullanım

Simmons sitrat agar belirli mikroorganizmaların, özellikle Enterobacteriaceae familyasına ait basillerin ve diğer glikoz fermente olmayan basillerin tanımlanmasında kullanılır..

Son düşünceler

Simmons sitrat besi çok hassas bir testtir, çünkü bazı hatalar yapılırsa yanlış pozitifler elde edilebilir..

Alınması gereken özen aşağıdaki gibidir:

aşı

Çok kalın veya yüklü bakteriyel bir inokulum yapmayın, çünkü bu, ortamın geri kalanını etkilemeden dikim yerinde gelişmekte olan sarı renkli bir renge neden olabilir, ancak büyüme olduğuna dair inanca yol açabilir. Aynısı testin pozitifliği anlamına gelmez.

Benzer şekilde, kalın bir inokülüm yanlış pozitif üretebilir, çünkü ölmekte olan bakterilerin hücre duvarlarında önceden oluşturulmuş organik bileşikler pH göstergesini döndürmek için yeterli karbon ve azot salgılayabilir.

Bu nedenle, ideal malzeme fazla malzeme almaktan kaçınmak için platin sapı yerine iğneyi kullanmaktır..

ekili

Öte yandan, söz konusu mikroorganizmanın tanımlanması için biyokimyasal testlerin pilinin ekilmesi durumunda, proteinlerin veya karbonhidratların başka bir ortamdan sürüklenmesini önlemek için ilk aşılanan ilk sitrat testi olması önemlidir..

Bu şartlar altında yanlış bir pozitif elde etmek mümkündür, çünkü yanlışlıkla verilen bu maddelerden herhangi biri metabolize olur ve pH'da bir değişikliğe neden olur.

Maddelerin sürüklenmesini önlemenin bir başka yolu, sapı iyi yakmak ve bir test ile diğer test arasında yeni inokulum almaktır..

Aşıyı gerçekleştirmek için koloniye dokunurken de dikkatli olunmalıdır, zira agarın bir kısmını daha önce anlatıldığı gibi bakterilerin geldiği kültürden sürüklemekten kaçınılması gerekir..

Bu anlamda, Matsen, Sherris ve Branson, diğer karbon kaynaklarının transferini önlemek için sitrat testini aşılamadan önce inokulumun fizyolojik çözelti içerisinde seyreltilmesini önermektedir..

Renk yoğunluğu

Test pozitif olduğunda üretilen rengin yoğunluğunun ticari eve göre değişebileceği dikkate alınmalıdır..

Ek olarak, 24 saatte pozitif test eden mikroorganizmalar vardır, ancak pH'da bir değişiklik üretmek için 48 saat veya daha fazla süren başka suşlar vardır..

referanslar

  1. Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  4. BD Laboratuvarları BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Erişim: bd.com
  5. Laboratuvarlar Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  6. Valtek Teşhis Laboratuvarları. Simmons Citrate Agar. 2016. Mevcut adres: andinamedica.com.