Agar çikolata temeli, kullanımları ve hazırlanması



çikolatalı agar katı, zenginleştirilmiş, seçici olmayan ve diferansiyel olmayan bir kültür ortamıdır. Her türlü bakteri üreyebilmesine rağmen, temel olarak beslenme açısından talep eden mikroorganizmaların izolasyonunda kullanılır..

Bu nedenle, özellikle CSF ve eklem sıvısı gibi normal olarak steril olan numunelerin tohumlanmasında yararlılığı artar. Aynı zamanda polimikrobiyal numunelerin ekilmesi için seçilen araçlara dahil edilmesine rağmen, bu durumlarda eşlik eden florayı engelleyen antibiyotikler eklemek gerekir.

Bu besiyeri çikolataya çok benzeyen karakteristik bir kahverengi renge sahiptir, dolayısıyla adı. Hazırlık kan agarına çok benzer, ancak bu durumda kırmızı kan hücrelerinin kırılması için kanın ısıtılması gerekir.

Kan agarı gibi hazırlanması, kolayca kontamine olduğu için çok hassastır. Bu nedenle birçok laboratuvar, kalitesini garanti eden ticari evler tarafından önceden hazırlanmış olan bu ortamı edinmeyi tercih eder..

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 kullanır
    • 2.1 Columbia agar ile hazırlanmış çikolatalı agar
    • 2.2 GC baz agar ile hazırlanan çikolatalı agar (gonokoklar için)
    • 2.3 Müeller Hinton agar ile hazırlanmış çikolatalı agar
    • 2.4 Thayer Martin agar ile hazırlanmış çikolatalı agar
  • 3 Hazırlık
    • 3.1 Hesaplamalar
    • 3.2 Tart ve çöz
    • 3.3 Sterilize etmek
    • 3.4 Kanın toplanması
    • 3.5 Kan kullanmadan çikolata agarı hazırlamanın başka bir yolu
  • 4 kalite kontrol
  • 5 Kaynakça

vakıf

Bu besiyeri, besinler açısından zengin ve ısıtılmış kandan zengin bir agar bazından oluşur. Kırmızı kan hücrelerinin hemolizi, cins gibi bazı mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan faktör X (hemin) ve faktör V (NAD) 'yi sağlar. Hemofilus. Ayrıca izolasyonu için çok yararlıdır. Neisserias sp.

Kanlı agar gibi, ihtiyaca bağlı olarak farklı ortamlar baz agar olarak kullanılabilir. Kullanılan ortamlar arasında beyin kalp enfüzyonu ve triptikaz soya agarı bulunur, ancak en çok önerilenler Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar ve Thayer Martin agardır..

Bazı çikolata agar varyantları, Isovitalex veya Polivitex adı verilen ticari olarak temin edilebilen zenginleştirilmiş bir takviye içerir..

Bu takviyeler B vitamini içerir12, L-glutamin, adenin, guanin hidroklorür, p-aminobenzoik asit, nikotinamid adenin dinükleotit (NAD), tiamin pirofosfat, ferrik nitrat, tiamin hidroklorür, sistein hidroklorür, L-sistin ve glukoz.

Çikolatalı agarın kanlı agardan daha zengin olduğunu, ancak hemoliz şekillerinin izlenmesine izin vermediğini not etmek önemlidir..

uygulamaları

Columbia agar ile hazırlanmış çikolatalı agar

Bu besiyeri kazein ve kalp pankreas ile sindirilmiş, sindirilmiş et peptidi, sodyum klorür, agar, maya özü ve mısır nişastası içerir. Aynı zamanda vitaminler, mineraller ve esansiyel amino asitler bakımından zengindir..

Isıtılmış kanlı bu baz, Neisseria cinsinin bakterilerinin izolasyonu için idealdir. Öte yandan, ortama Brucella takviyesi ilave edilirse, yukarıda bahsedilen mikroorganizma izole edilebilir. Sonuçlar at kanı kullanılarak iyileştirildi.

GC baz agar ile hazırlanan çikolatalı agar (gonokoklar için)

Bu besiyeri peptonlar, mısır nişastası, monobazik ve dibazik tamponlar, sodyum klorür ve agar içerir.

Ticari olarak hazırlanmış çikolatalı agar sunumlarının çoğu bu bazla gelir ve ısıtılmış kan içermez, ancak sentetik bir hemin karışımı ve büyüme faktörlerinin, vitaminlerin, minerallerin, amino asitlerin, faktör V ve glikozun kimyasal bir tamamlayıcısını içerir..

Müeller Hinton agar ile hazırlanmış çikolatalı agar

Bu gibi talep mikroorganizmaların antimikrobiyal duyarlılık testini yapmak için kullanılır Streptococcus pneumoniae % 5 ısıtılmış koç kanı kullanarak.

Aynı zamanda, Neisserias ve Haemophilus'un primer izolasyonu için hizmet eder, ancak özel olarak izolasyonu durumunda Hemofilus at kanı kullanımı tercih edilir, çünkü zengin bir X ve V faktörü kaynağıdır..

Diğer yandan, ekilecek olan numune steril olmayan bir bölgeden geliyorsa, alanın normal florasını engellemek için antibiyotik ilavesi önerilir..

Cinsinin bakterisinin varlığından şüphelenilen solunum yolu örnekleri için örnek Hemofilus Bacitracin büyümesini engellemek için kullanılır Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus ve Saprofitik Neisseria.

Genital chancre örnekleri durumunda, şüpheli olduğu yerde Haemophilus ducreyi, Aşağıdaki şekilde hazırlanan bir çikolatalı agar başarıyla kullanılmıştır:% 5 çikolata at kanı,% 1 Isovitalex zenginleştirme ve 3 μg / ml vankomisin içeren Müeller-Hinton ağarı.

Thayer Martin agar ile hazırlanmış çikolatalı agar

Bu besiyeri izolasyonu için özeldir. Neisseria gonorrhoeae. Eşlik eden florayı engellemek için antibiyotik içermesi gerekir. Kuzu kanı kullanılır.

hazırlık

Kullanılacak olan baz agarın hazırlanmasına ilişkin endikasyonlar görülmelidir. Susuz ortam paketinin arkasındadırlar. Genellikle bir litre kültür ortamı hazırlamak için ne kadar ağırlık gerektiğini açıklarlar..

Laboratuarda ihtiyaç duyduğunuz miktarda hazırlayabilirsiniz, bir litreden az ya da çok olabilir.

hesaplamalar

İstenen hacmi hazırlamak için ne kadar ağırlık gerektiğini hesaplamak için üç kuralı yapılır. örnek:

1 litre için 40 gr ağırlığında gerekli ise ve laboratuvar 800 ml gerektiriyorsa:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formül aşağıdaki gibi olacaktır:

X = 32 gr (800 ml ağırlığa kadar olan miktar).

Tartılır ve çözülür

Gerekli miktarı tartmaya devam ediyoruz ve su ile bir fiola içerisine yerleştiriyoruz..

Orta dereceli bir ısıya ısıtın ve kurutulmuş ortam tamamen çözülene kadar döner hareketlerle hafifçe karıştırın ve 1 dakika kaynatın..

sterilize etmek

Fiola, ortamı 20 dakika boyunca 121 ° C'de sterilize etmek için otoklava sokulur..

Kan birikimi

Otoklavdan ayrılırken kanın yerleştirilmesi için ortamın sıcaklığı yaklaşık 56 ila 70 ° C arasında olana kadar dinlenmeye bırakılır ve ortam kahverengileşinceye kadar karıştırılır.

Takviyeler ekleyecekseniz, bunu yapmanın tam zamanı. Daha sonra karıştırın ve her steril Petri kabına 20 ml servis yapın.

Tüm prosedür bir laminer akış başlığı veya Bunsen brülörü çevresinde gerçekleştirilmelidir..

Katılaşana ve buzdolabında ters çevrilinceye kadar bekletin.

Kan kullanmadan çikolata agar hazırlamak için başka bir yolu

Baz ortamı yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanır, ticari olarak elde edilen kurutulmuş hemoglobin çözülür ve otoklavda sterilize edilir.

Her iki çözeltinin de 50 ° C'ye soğumasına izin verilir, eklenir ve birleştirilir. Aseptik koşullarda karıştırın ve daha sonra steril petri kaplarında servis yapın.

Kalite kontrol

Kanın belirtilen sıcaklığa getirilmesi önemlidir, çünkü kırmızı kan hücrelerini lize etmek ve aynı zamanda termosensitif olan V faktörünü korumak idealdir..

Agarın yüzeyinde kabarcık olmamalıdır. 100 plakadan oluşan her parti, sterilitesini kontrol etmek için 24 saat boyunca 37 ° C'de sobada bir veya iki plaka kuluçkalanmalıdır..

En iyi sonucu almak için hazırlandıktan kısa bir süre sonra çikolatalı agar kullanılmalıdır..

Taze hazırlanmış besiyerinin klinik öneme sahip temel zorlu mikroorganizmaların büyümesi için etkinliğini değerlendirmek üzere laboratuvarda kontrol bakteri suşları alınmalıdır..

referanslar

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Pratik klinik mikrobiyoloji. Cadiz Üniversitesi, 2. baskı. UCA Yayınları Servisi.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Arjantin. Panamericana S.A Editörden.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı (5. basım). Arjantin, Editör Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzán D, Llop A. GC-Biocen Agar baz kültür ortamının Mikrobiyoloji Laboratuvarında kullanımının fizibilitesi. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238 sayılı belgeler. Erişim: scielo.sld.
  5. Wikipedia katılımcıları. Çikolatalı ağar. Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 17 Aralık 2018, 19:54 UTC. Erişim: en.wikipedia.org.