Agar BHI Vakfı, hazırlık ve kullanım



BHI agar veya Brain Heart Infusion agar besleyici bir katı kültür ortamıdır. İspanyolca'da buna beyin kalp infüzyon agarı denir. Seçici olmayan bir kültür ortamıdır, yani tüm Gram pozitif ve Gram negatif bakterilerin yanı sıra bazı maya ve filamentli mantar türlerinin geliştirilebileceği anlamına gelir.

Dana beyin ve kalp infüzyonu, hayvansal dokuların peptik hidrolizatı, kazein pankreas hidrolizatı, sodyum klorür, glukoz, disodyum fosfat ve agardan oluşur..

BHI agarının bakteriyoloji laboratuarlarında en sık kullanılan kültür ortamlarından biri olduğu belirtilmelidir. Birincil kültür, diğer seçici ortamlarda elde edilen kolonilerin alt kültürü veya laboratuardaki suşların bakımı için takviye olmadan kullanılabilir..

Öte yandan, kanlı agar ve çikolata ağar gibi zenginleştirilmiş ortamların hazırlanmasında baz olarak kullanılması ideal bir ortamdır. Her ikisi de zorlu mikroorganizmaları beslenme açısından izole etmek için idealdir. Bununla birlikte, glikoz içerdiğinden hemoliz yapılarını gözlemlemek için yeterli olmadığı göz önünde bulundurulmalıdır..

Benzer şekilde, BHI agar, ortak ortamlarda zorlu büyüme gösteren patojenik mikroorganizmaların izolasyonu için özel vasıtaların hazırlanmasında, bunların arasında kullanılabilir: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ve Histoplasma capsulatum.

Antibiyotik katkısı ile BHI agar mantarların izolasyonu için seçici bir ortam haline gelir.

indeks

  • 1 Vakfı
  • 2 Hazırlık
    • 2.1 Takozlar
    • 2.2 Tabaklar
    • 2.3 Kanlı agarın hazırlanması
  • 3 Kullanım
    • 3.1 Ek olmadan kullanın
    • 3.2 Diğer medyaların hazırlanmasında temel bir agar olarak
  • 4 kalite kontrol
  • 5 Kaynakça

vakıf

Orta derecede zorlu mikroorganizmaları izole etmek, kan ve diğer besin takviyelerinin eklenmesiyle zenginleşmesini artırabilmek besleyici bir kültür ortamıdır..

Seçici olmayan bir kültür ortamıdır, bu nedenle bazı mantarların yanı sıra Gram pozitif ve Gram negatif bakterilerin çoğunun büyümesine izin verir. Ancak, antibiyotik ilavesiyle seçici hale gelebilir.

Ortam, baldır beyninin ve kalbin infüzyonunu, hayvan dokularından hidrolizat peptidini ve kazein pankreas hidrolizatını; Bütün bu bileşikler; vitamin, amino asit, azot ve karbon kaynağı olarak hareket eder..

Glikoz, fermente edildikten sonra mikroorganizmalara enerji sağlayan bir karbonhidrattır. Oysa, sodyum klorür ve disodyum fosfat ozmotik dengeyi korur ve nötrlüğe yakın bir pH sağlar. Son olarak, agar ortama katı bir tutarlılık verir..

hazırlık

Susuz ortamın 52 gramını tartın ve bir litre damıtılmış su içinde eritin. Karışımı, kaynamaya kadar bir ısı kaynağına getirin, çözünme işlemi sırasında sık sık karıştırarak.

Katkı maddesi olmadan BHI agar kamalarını veya plakalarını hazırlayabilirsiniz..

takozlar

Takozların hazırlanması için, her bir tüpün yarısını dolduracak şekilde hazırlığa hizmet edin, katılaştırılıncaya kadar bir baz üzerinde uzanmaya devam ederken, 15 dakika boyunca 121 ° C'de otoklavda örtün ve sterilize edin. Ardından kullanana kadar buzdolabında saklayın..

plakalar

Çözünen karışım 121 ° C'de 15 dakika boyunca otoklavlanır, bıraktığı zaman 50 ° C'ye soğumaya bırakılır ve ortamın 20 ml'si steril Petri kaplarında servis edilir. Katılaşmasına, ters çevrilmesine ve kullanılıncaya kadar buzdolabında saklanmasına izin verilir. Ekimden önce plakaların oda sıcaklığına çıkmasını sağlayın.

Ortamın pH değeri 7.4 ± 0.2 olmalıdır.

Hazırlıksız besiyeri bej ve hazır sarı renktedir..

Kanlı agarın hazırlanması

Ortamı sterilize ettikten sonra, yaklaşık 45 ila 50 ° C'lik bir sıcaklığa soğutun, bu sırada kanı (50 mi) ilave edin, homojenleştirmek için hafifçe karıştırın ve her Petri kabında aseptik olarak 20 ml servis yapın. Tabakta kabarcıklar oluşuyorsa, brülörün alevi bunları gidermek için kabarcıkların üzerinden hızla geçmelidir..

Benzer şekilde, karışım 45 ila 50 ° C sıcaklığa ulaştığında karşılık gelen katkı maddelerinin eklenmesiyle özel ortamlar hazırlanabilir.

Orta kiraz kırmızısı.

uygulamaları

Takviyesi olmadan kullanın

Katkı maddesi içermeyen BHI agar, bir birincil kültür olarak ve daha sonra tanımlanması için orta veya orta derecede talep eden mikroorganizmaların saf suşlarının ekiminde faydalıdır..

Açık renkli bir ortam olduğu için, pigmentleri gözlemlemek için idealdir ve ayrıca etkileşimli maddeler içermediğinden, oksidaz ve katalaz gibi biyokimyasal testleri yapmak veya bundan kaynaklanan kolonilerden diğer biyokimyasal testleri yapmak için kullanılabilir. agar.

Aynı şekilde, BHI agar takozları laboratuvarda belirli bir süre suşlarının bakımı için yaygın olarak kullanılmaktadır (bakteriiyok).

Bakteriyel suşlarla yüzeye ekilen plakalar veya takozlar, 37 ° C'de 24 ila 48 saat süreyle inkübe edilir. Mantarlarda sıcaklık ve inkübasyon süresi aranan mantarın türüne bağlı olacaktır..

Diğer medyanın hazırlanması için temel bir agar olarak

Bu taban ile zenginleştirilmiş ve seçici ortam hazırlanabilir.

zenginleştirilmiş

Başlıca işlevi, mikrobiyoloji laboratuvarlarında rutin kullanım için kanlı agar hazırlanmasında temel teşkil etmektir. Özellikle, BHI bazı suşlarının izolasyonuna elverişlidir Streptococcus sp. Bununla birlikte, hemoliz yapılarını gözlemlemek için uygun olmama dezavantajı vardır çünkü glikoz içermektedir.

Ayrıca tavşan veya at kanı agarının hazırlanmasında kullanılır. Haemophilus sp. Daha iyi sonuçlar için zenginleştirme takviyesi ekleyebilirsiniz (IsoVitaleX).

Örnekler solunum yolundan agar'a gelirse, beraberindeki florayı inhibe etmek ve suşlarının geri kazanım olasılığını arttırmak için bacitrasin eklenebilir Haemophilus sp.

Öte yandan, kan agarı (kuzu veya insan) izole etmek için tellürit sistin ile hazırlanabilir. Corynebacterium diththeriae. Aynı şekilde, tavşan kanı agarının hazırlanması, sistin ve glukoz ilavesi ile birlikte izolasyonu için yararlıdır. Francisella tularensis.

Kan agar plaklarının tohumlanması tükenme ile yapılır ve 35-37 ° C'de 24-48 saat mikroaerofilik (% 5-10 CO) inkübe edilir2).

selektif

Antibiyotik ilaveli bu besiyeri mantarların izolasyonu için Sabouraud agar'ın yerini alabilir..

BHI agarın kloramfenikol - gentamisin veya penisilin -, streptomisin ve at kanı ile kombinasyonu, izole edilmesi için idealdir. Histoplazma capsulatum.

İzole edilecek mikroorganizmaya bağlı olarak, 35-37 ° C'de veya oda sıcaklığında aerobiyozda inkübasyon önerilir. Bazen bunun için 2 plaka kullanarak inkübasyon her iki sıcaklık aralığında da gereklidir.

Bazı mantarlar sever Trichophyton mentagrophytes oda sıcaklığında 7 güne kadar inkübe edilmelidirler.

Kalite kontrol

Hazırlanan her partiden, 24 saat boyunca 1 plakanın veya kamanın 37 ° C'de inkübe edilmesi ve bir gelişme olmadığını doğrulamak önerilir; Kanlı agar hazırlarken özellikle önemlidir, çünkü kolayca kontamine olmuş bir ortamdır.

Öte yandan, ortamın kalitesi bilinen veya sertifikalı standart suşları aşılayarak ve gelişimlerini gözlemleyerek değerlendirilebilir..

Bu anlamda BHI agarını katkı maddesi olmadan değerlendirmek, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 veya Candida albicans ATCC 10231. 37 ° C'de aerobiyozda 24 ila 48 saat inkübe edilir. Her durumda tatmin edici bir büyüme beklenir.

Kan agar plaklarını değerlendirmek, suşlarını  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 veya Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriyel suşlar, 37 ° C'de mikroaerofilikte 24 saat kuluçkada bekletilirken, mantar oda sıcaklığında nemli bir odada 7 güne kadar kuluçkaya bırakılır. Her durumda tatmin edici bir büyüme beklenir.

referanslar

  1. Laboratuvarlar Britania. Beyin Kalbi İnfüzyon Agar. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com.
  2. BD Laboratuvarları Beyin Kalp İnfüzyonu (BHI) Agar. 2013. Erişim: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratuvarları, S.A. Beyin Kalbi İnfüzyon Agar. 2009.
  4. Neogen laboratuvarı. Beyin Kalbi İnfüzyon Agar. Erişim: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar kanı: temeli, kullanımı ve hazırlanması. 2018. Uygun fiyat: lifeder.com.
  6. Wikipedia katılımcıları. Beyin kalp infüzyonu Vikipedi, Özgür Ansiklopedi. 19 Eylül 2018, 03:58 UTC. Erişim: wikipedia.org. Erişim tarihi: 2 Mart 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.