Mayıs Grünwald-Giemsa Vakfı boyası, teknik ve kullanım



Grünwald-Giemsa lekesi olabilir o Pappenheim, Giemsa ve May Grünwald reaktiflerini karıştıran farklı bir renklendirme tekniğidir. Periferik kan ve kemik iliğinin smearlerinde normal ve anormal kan hücrelerinin farklılaşması, histolojik bölümlerin ve sitolojik örneklerin boyanmasında kullanılır..

Her iki reaktif - Gemsa ve May Grünwald - asit ve bazik boyaların kombinasyonuna dayanan bir teknik olan Romanowsky tipi boyamadan elde edilir.

Giemsa, eozin, metilen mavisi ve türevlerinin karışımını, gliserol ile stabilize ederek tekniği geliştirdi. Buna karşılık, May Grünwald çözücü olarak metanol kullanarak eozin ve metilen mavisi kullanır. Bu stratejik kombinasyon mükemmel sonuçlar verdi.

Hücre morfolojisinin gözlemlenmesi açısından Giemsa ve Wright renklerine benzer şekilde davranmasına rağmen, bu teknik sıtmaya, Chagas hastalığına, leishmaniasis ve trichomoniasis'e neden olan parazitlerin renklendirilmesinde ince ayar yaparak öncekileri geliştirir..

Ek olarak, sperm sıvısının sitolojik incelemesi için çok faydalı bir teknik olduğu kanıtlanmıştır. Sadece spermin morfolojik özelliklerini göstererek değil, aynı zamanda yüksek verimli lökositleri, epitel hücrelerini ve spermatogenez hücrelerini ayırt etmeyi sağlar..

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 Çeşitli boyalar
  • 2 Tekniği
    • 2.1 Malzemeler
    • 2.2 Konsantre boya çözeltisi May Grünwald
    • 2.3 Konsantre Giemsa boyası
    • 2.4 pH 7.2'de tampon çözeltisinin hazırlanması
    • 2.5 Kan bulaşması veya kemik iliği boyama prosedürü
    • 2.6 Sperm sıvısının genişletilmiş renklendirme tekniği
    • 2.7 Önemli özellikler
  • 3 Kullanım
    • 3.1 Vajinal sitoloji
    • 3.2 Sperm örneği
  • 4 Kaynakça

vakıf

Teknik, Romanowsky'nin asit boyalarının hücresel bazik bileşenler için seçici bir afiniteye sahip olduğu ve asidik bileşenlerin bazik boyaları çektiği lekelerin temelini takip eder..

Başka bir şekilde anlatıldığı gibi, hem hücre yapıları hem de boyalar pozitif veya negatif elektrik yüklerine sahiptir; eşit ücret iadesi ve farklı ücretler çekilir.

Örneğin, metilen mavisi gibi bazik boyalar pozitif olarak yüklenir ve negatif yüklü yapılar tarafından çekilir. Bu boya, negatif yüklü fosfat gruplarına sahip DNA ve RNA yönünden zengin olan çekirdekleri lekelemesinin nedeni budur..

RNA içeren mononükleer beyaz kan hücrelerinin bölünmüş bazofillerinin ve sitoplazmalarının granülleri de boyanır..

Benzer şekilde, asit boyası negatif bir yük taşır, bu nedenle eritrositler ve bölümlenmiş eozinofillerin granülleri gibi pozitif yüklü yapılara katılır. Parçalı nötrofillerin granülleri ise, bunlar her iki boyayı da sabitler..

Renklendirici çeşitliliği

Bu teknikte, orkromatik boyalar ve metakromatikler arasındaki reaksiyonların bir arada var olması. Ortokromatikler (eozin ve metilen mavisi) ilişkili oldukları hücre yapısına bağlanır ve değişmeyen stabil bir renk sağlar.

Öte yandan, metakromatikler (metilen mavisi Aure ve B masmavi B'nin türevleri), belirli bir yapıya bağlandıklarında orijinal renklerini değiştirirler ve hatta çeşitli renk tonları olabilir..

Son olarak, May Grünwald çözeltisinin taşıdığı adım suyun varlığını gerektirir, çünkü onsuz boya yapılara nüfuz eder ancak sabit olmaz. Bunun gerçekleşmesi için boyanın polarize veya iyonlaştırılmış olması ve böylece çökeltilmesi ve ilgili yapılara bağlanabilmesi gerekir.

teknik

malzemeler

- Slaytlar için slaytlar.

- Boyama köprüleri.

- May-Grünwald'ın Çözümü.

- Giemsa lekesi.

- Damıtılmış su.

Konsantre boya çözeltisi May Grünwald

0.25 g eozin-metilen mavisi (May Grünwald'a göre boya) tartmalı ve 100 ml metanol içinde çözmeliyiz. Karışım daha sonra 1 saat karıştırılır ve 24 saat bekletilir. Zaman bitmiş, filtreler.

Tekniği uygulamak için, May Grünwald boyası şu şekilde seyreltilmelidir: 200 ml seyreltilmiş boya için, 30 ml konsantre çözelti ölçülür, 20 ml tampon çözeltisi ve pH7.2-7.3'e ayarlanmış 150 ml damıtılmış su eklenir. . Daha sonra karıştırılır ve süzülür.

Konsantre Giemsa boyası

0.5 g azur-eozin-metilen mavisi (Giemsa'ya göre boya) tartılır, 50 ml metanol içinde çözülür ve karışıma 50 ml gliserin yerleştirilir.

Tekniği uygulamak için, 1:10 tampon solüsyonu ile seyreltin ve 10 dakika dinlendirin. Gerekirse filtrelenebilir.

PH 7.2'de tampon çözeltisinin hazırlanması

Tartılmaları gerekir:

- 40 mg potasyum di-hidrojen fosfat (KH2P04).

- 151 mg di-sodyum hidrojen fosfat 12-hidrat (Na2HP04).

Her iki bileşik de 100 ml suda çözülür.

Kan bulaşması veya kemik iliği boyama prosedürü

İki yöntem var: klasik ve hızlı.

Klasik mod

  1. Lekeleri 2 veya 3 dakika seyreltilmiş May-Grünwald çözeltisiyle örtün.
  2. Önceki çözeltiyi çıkarmak için tamponlu distile suyla yıkayın.
  3. Aynı tamponlu yıkama çözeltisiyle örtün ve 1 dakika bekletin. Buradaki fikir, önceki boyanın yapılara sabitlendiği ve aynı zamanda hücrelerin hidratlandığı..
  4. Tamponlu suya 12 damla seyreltilmiş Giemsa tentürü ekleyin ve karıştırıp homojenleştirmek için üfleyin. 15 veya 20 dakika bekletin.
  5. Lekeleri tamponlu saf suyla yıkayın ve kurumaya bırakın.
  6. Odaklanın ve optik bir mikroskopta gözlemleyin, kan hücrelerinin 40X hedefini kullanarak lekeli. Gerekirse, 100X kullanılabilir.

Hızlı mod

  1. Smear'i 1 Mayıs seyreltilmiş May Grünwald boyası ile örtün.
  2. Tampon damıtılmış suyla yıkayın.
  3. Tamponlu su ile örtün ve 1 dakika bekletin.
  4. Seyreltilmiş Giemsa boyasını yerleştirin ve 5 dakika bekleyin..
  5. Tampon damıtılmış suyla yıkayın ve kurumaya bırakın.

Burada açıklanan teknikler yol gösterici bir rehberdir, ancak prosedürlerin ve renklendirme sürelerinin reaktifleri sağlayan ticari eve göre değiştiği göz önünde bulundurulmalıdır. Her ticari ev tarafından kesin olarak belirtilen adımları izlemeniz önerilir..

Sperm sıvısı genişletilmiş renklendirme tekniği

1- Forma 4 dakika boyunca ince bir May Grünwald çözeltisi katmanı ile örtülür..

2- Boyayı çıkarın ve distile suyla yıkayın.

3- 15 dakika boyunca distile suya seyreltilmiş bir Giemsa tabakası (1:10) yerleştirin.

4- Boyayı çıkarın ve saf su ile yıkayın..

5- Mikroskobun altında kurumasını ve gözlemlenmesini sağlayın..

Önemli özellikleri

Teknik, reaktiflerin ve yıkama solüsyonlarının 7.2-7.3'e ayarlanmış bir pH'a sahip olmasını gerektirir, böylece boyaların hücre yapıları için afiniteleri bozulmaz ve beklenen nihai rengi değiştirmez.

uygulamaları

Bu teknik klinik laboratuvarlar tarafından periferik kan ve kemik iliği lekelerini, doku kesitlerini ve sitolojileri lekelemek için kullanılır..

Hematolojik alanda, bu teknik şekil, boyut ve sayı bakımından hücrelerin anormalliklerinin çalışılmasında hayati öneme sahiptir. Lösemi ve anemi gibi bazı hastalıkların teşhisi için çok değerli bir araçtır.

Ek olarak, hematolojik alanlarda parazitleri ararken olağanüstü bir fayda sağlar (Plasmodium sp ve Trypanosoma cruzi) veya histolojik (Leishmanias sp).

Vajinal sitoloji

Vajinal sitolojiye gelince, bu teknik özellikle gözlem için avantajlıdır. Trichomonas vaginalis. Bu önemli bir bulgu, çünkü varlığı karsinoma resimlerini simüle ediyor yerinde bu, parazit yok edildiğinde ortadan kaybolur.

Sperm örneği

Sperm örneklerinin incelenmesi için ideal bir araç olmuştur, çünkü spermin kalitesi hakkında değerli bilgiler sağlar..

Sunulan veriler esas olarak sayı ve morfoloji ile birlikte, mevcut olabilecek ve germ hücreleri, lökositler ve epitel hücreleri gibi hayati öneme sahip olan hücrelerle de ilgilidir..

Bu analizle baş, boyun, orta parça ve ana parçadaki spermlerde gözlenen anormallikleri tanımlamak mümkündür..

Ek olarak, hemospermi (semende kırmızı kan hücrelerinin varlığı) ve lökospermi veya pospermi (semende lökosit sayısındaki artış) durumlarını göstermeye de yardımcı olabilirler..

referanslar

  1. Costamagna S, Prado M. Yeni testin onaylanması, May Grünwald-Giemsa ve Gram renkleri ve kültür ortamının teşhisi için Trichomonas vaginalis. Parasıtol. 2001; 25 (1-2): 60 - 64. Mevcut: scielo.
  2. Merck KGaA laboratuvarı. Mayıs Grünwald eosin mikroskopi için metilen mavisi.
  3. "May-Grünwald-Giemsa lekesi." Vikipedi, özgür ansiklopedi. 15 Kas 2018, 14:37 UTC. 8 Ocak 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratuar Cam Kimyasalları Panreac. Histolojik teknikler, hematoloji ve mikrobiyoloji için reaktifler. Uygun fiyat: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Kan sayısını okumak için kan lekelerinin lekelenmesi için öneri. Ulusal ve Referans Biyomedikal Laboratuvarı. Şili Halk Sağlığı Enstitüsü.
  6. Sarabia L. Spermiyogram WHO kriterlerine göre. Anatomi ve Gelişim Biyolojisi Programı. Tıp Fakültesi Şili Üniversitesi Erişim: pp.centramerica.com