MIO orta temeli, hazırlanması ve kullanımı



yarım MIO Enterobacteriaceae familyasına ait bakteri türlerinin tanımlanmasına yardımcı olmak için kullanılan bir biyokimyasal testtir. Oldukça besleyicidir ve glukoz, maya özü, pepton, triptein, L-ornitin hidroklorür, mor bromosresol ve agardan oluşur..

Kısaltmasının (MIO) anlamı, bu ortamda gözlenebilecek parametrelerin her birini tanımlar; hareketlilik, indol ve ornitin. Motilite, mikroorganizmanın flagella mevcudiyeti ile hareket etme yeteneğidir. Bu özelliğin gözlenebilmesi için, ortamın tutarlılığının yarı katı olması gerekir; bu nedenle preparat daha az miktarda agar içerir..

İndol üretimi, amino asit triptofanına etki eden triptofanaz enziminin varlığını kanıtlar; bu, indol üretimini görünür kılmak için açığa çıkan bir reaktifin kullanılması gerekli olur..

Son olarak, ornitin, bakterinin amino asidi dekarboksilasyonu yapıp yapamayacağını, yani enzimin orinitin dekarboksilaz olup olmadığını belirler..

indeks

  • 1 Vakfı
    • 1.1 Pepton, maya özütü ve triptein
    • 1.2 Hareketlilik
    • 1.3 Glikoz
    • 1.4 L-Ornitin
    • 1.5 pH göstergesi
  • 2 Tohumlama ve geliştirme tekniği
  • 3 Hazırlık
    • 3.1 MIO Orta
    • 3.2 Kovacs reaktifi (Indole test geliştiricisi)
  • 4 kullanım
  • 5 kalite kontrol
  • 6 Kaynakça

vakıf

Pepton, maya özü ve triptein

Bu elementler, bu besiyerinin besleyici gücüne katkıda bulunur. Bakteriyel gelişim için besin kaynağı ve esansiyel amino asitler olarak görev yaparlar.

Ek olarak, triptein, indol, piruvik asit, amonyak ve enerji salgılayan bir indirgeyici deaminasyonla triptofanı parçalayan enzim triptofanazın varlığını kanıtlayan bir triptofan kaynağıdır..

İndol renksiz olduğundan, her ikisi de p-dimetilaminobenzaldehit içeren beş damla Ehrlich veya Kovacs reaktifi ekleyerek varlığı ortaya çıkar..

Bu bileşiğin aldehit grubu, agar yüzeyinde halka şeklinde fuşya kırmızısı bir ürün oluşturarak indol ile reaksiyona girer.

Herhangi bir renk izi pozitif kanıt olarak kabul edilmelidir. Test hemen okunmalıdır, çünkü bir süre sonra renk bozulur..

Diğer taraftan, bu test ornitinin motilite ve dekarboksilasyonunun sonuçlarını kaydettikten sonra ortaya çıkarılmalıdır..

yorumlama

Pozitif test: Kovacs reaktif damlalarını eklerken fuşya kırmızı halka oluşumu.

Olumsuz test: halka oluşumu yok.

motilite

Bulanık bir ortam gözlenirse veya ilk aşılama çevresinde genişleyen kalın bir büyüme çizgisi varsa bakterilerin hareket kabiliyeti kanıtlanacaktır..

Negatif bir hareketlilik testi, ince bir büyüme çizgisi gözlemlenerek kanıtlanacak ve her yerde büyüme olmadan yapılacaktır..

Reaktif eklenmesi tüm ortamı bulanıklaştırdığından, indol ortaya çıkmadan önce hareketliliğin okunması önemlidir..

Mobil fakat yavaş büyüyen bakterilerde, bu besiyeri ile hareket kabiliyetlerini göstermek zordur. Bu durumda, hareketlilik ortamı veya bırakma yöntemi gibi başka testler veya yöntemler kullanılması önerilir..

glikoz

Glukoz, enerjinin sağlanmasına ek olarak, ortamı asitleştiren, amino asit ornitinin dekarboksilasyonu için gerekli bir koşul olan mayalanabilir karbonhidrattır..

Enterobacteriaceae fermente glikoz ailesine ait tüm bakterilerin prensibi ile glukozun fermantasyonu her zaman gerçekleşmelidir..

L-ornitin

Bakterinin enzim ornitin dekarboksilaz üretmesi durumunda, ortam glikozun fermantasyonu ile asitlendikten sonra etkili olabilir..

Ornitin dekarboksilaz enzimi, besiyeri tekrar alkalileştiren putresin adı verilen bir amin üreten amino asidin karboksil grubuna etki eder..

Bu test 24 saatlik inkübasyondan sonra okunmalıdır, çünkü eğer daha önce okumaya çalışırsanız testi yanlış negatifle yanlış yorumlayabilirsiniz..

Ortaya çıkan ilk reaksiyonun, glikozun fermantasyonu olduğu, böylece ortamın bir ilk fazda (ilk 10 ila 12 saat) sarardığı hatırlanmalıdır. Eğer ornitinin dekarboksilasyonu daha sonra meydana gelirse, ortam morlaşacaktır..

İndol ortaya çıkmadan önce ornitin dekarboksilasyon testinin yorumlanması önemlidir, çünkü Kovacs reaktifinin eklenmesi ortamın rengini değiştirir.

yorumlama

Olumsuz test: orta sarı veya sarı arka plana sahip.

Pozitif test: tamamen mor.

PH göstergesi

Bu durumda bromocresol mor kullanılır; Ortada bir pH değişimi olduğunda açığa çıkan kişi. Asitlendiğinde, gösterge sararır ve alkalize olduğunda mora döner.

Tohum ve gelişme tekniği

MIO ortamını yerleştirmek için, düz bir ilmek veya iğne kullanılır ve bununla birlikte çalışılacak koloninin bir kısmı toplanır..

MIO ortamında düz bir çizgide derin bir delik açıldı. Delinmeler aynı yerde yapılmadığında yanlış bir hareketlilik görüntüsü verebileceği için çift delme yapılması önerilmez..

Aerobiyozda 37 ° C'de 24 ila 48 saat inkübe edin. Sonuçları bu sıraya göre izleyin: hareketlilik, ornitinin dekarboksilasyonu ve sonunda indol ortaya.

Aseptik olarak 2 ml ortam alınması, steril bir tüpe aktarılması ve indol testinin orada yapılması tavsiye edilir, böylece negatif olursa, orijinal tüpün geri kalanı, indolü tekrar ortaya çıkarmak için 24 saat kuluçkalanabilir..

İndol gelişimi şu şekilde gerçekleştirilir: MIO ortamına 3 ila 5 damla Kovacs reaktifi ilave edilir ve kuvvetlice karıştırılır. Fuşya kırmızı bir halkanın görünüp görünmediği gözlenir..

hazırlık

Yarım mio

31 gr MIO besiyerini tartın ve bir litre distile suda eritin.

Karışım bir dakika kaynayana kadar ısıtın, agar tamamen çözülene kadar sık ​​sık karıştırın. Pamuk kapaklı 13/100 test tüplerinde 4 ml ortamın dağıtın.

Otoklavda 121 ° C'de 15 dakika sterilize edin. Otoklavdan çıkarın ve yarı katı bir blok oluşacak şekilde dik olarak rafta durmasına izin verin.

Buzdolabında 2-8 ° C saklayın Bakteriyel suşu ekmeden önce tavlanmaya izin verin.

Susuz ortamın rengi bejdir ve ortamın rengi biraz mor renkte yanar.

Hazırlanan ortamın son pH değeri 6.5 ± 0.2

Ortam, asidik pH ile sarıya döner ve alkalin pH'ta mor renktedir..

Kovacs reaktifi (İndol test geliştiricisi)

Bu reaktif aşağıdaki gibi hazırlanır:

150 ml amil, izoamil veya bütil alkol (üçünden herhangi biri) ölçülür. İçinde 10 g p-dimetilaminobenzaldehit eritilir. Daha sonra yavaş yavaş 50 ml konsantre hidroklorik asit eklenir.

Hazırlanan reaktif renksiz veya açık sarıdır. Amber bir şişede saklanmalı ve buzdolabında saklanmalıdır. Koyu kahverengi renk bozulma göstermektedir.

Ayrıca Kovacs reaktifi Ehrlich reaktifi ile değiştirilebilir. Daha hassas olan, ikincisi, bazı Gram negatif fermente olmayan basiller ve bazı anaeroblarda olduğu gibi, minimum miktarlarda üreten bakterilerde indol ortaya çıkarmak için tercih edilir..

kullanım

Bu besiyeri, Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin tanımlanması için bir biyokimyasal test pilini tamamlayan bir testtir.

Ornitinin dekarboksilasyon verileri, farklılaşmaya yaramaktadır Shigella sonnei, Bu, olumlu verir Shigella boydii, Shigella flexneri ve S. dysenterieae, negatif olan.

Ayrıca negatif veren Klebsiella cinsini, türlerinin çoğunun pozitif olduğu Enterobacter cinsini de ayırt eder..

Kalite kontrol

Bir yığın MIO ortamı hazırlandığı zaman, bir kontrol testi gerçekleştirilebilir. Bunun için, ortamın davranışını gözlemlemek için bilinen veya sertifikalı türler kullanılır.

Kullanılabilecek suşlar Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ve Proteus mirabilis.

Beklenen sonuçlar E. coli ve M. morganii. Dan M: +, I: + ve O: +.

Klebsiella pneumoniae tüm negatifleri verir (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis ve Enterobacter aerogenes dan M: + I: - ve O: +.

referanslar

  1. Mac Faddin J. (2003). Klinik öneme sahip bakterilerin tanımlanması için biyokimyasal testler. 3. baskı Editörden Panamericana. Buenos Aires Arjantin.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.
  4. Laboratuvarlar Britania. MIO Medio 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
  5. BD Laboratuvarları BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Orta. 2007. Erişim: bd.com
  6. Valtek Laboratuvarları Orta M.I.O. Hareketlilik, İndol, Ornitin. 2010. Mevcut adres: andinamedica.com