Peptonlu su temeli, hazırlanması ve kullanımı

peptonada suyu seçici olmayan bir sıvı zenginleştirme ortamıdır, temel olarak gıda örnekleri veya diğer malzemeler için bir seyreltici olarak kullanılır. Bu, kimyasal açıdan çok basittir, pepton et, sodyum klorür ve su içerir..

Numuneyi zenginleştirmeye izin veren belli bir besin değeri vardır. Hırpalanmış bakteri varsa, bu demektir ki, canlılığı onarabilir. Enterobacteriaceae familyasına ait bakterilerin geri kazanılmasında özellikle yararlıdır..

Salmonellas'ın geri kazanılması durumunda, tamponlanmış peptonada su varyantının kullanılması önerilir; Bu, örneğin ön zenginleştirme aracı olarak işlev görür, bu durumda disodyum fosfat ve dipotasyum fosfat gibi başka elementler içerir..

Normal olarak peptonada suyu nötr pH'da hazırlanır, ancak pH'ın 8,5 ± 0,2 (alkalin) olması gerektiği başka varyantlar da vardır, çünkü izole edilecek bakteriler alkalofiliktir; Vibrio cholerae.

Öte yandan, bu besiyeri karbonhidrat fermentasyon testleri için bir besiyeri olarak kullanılabilir..

indeks

• 1 Vakfı
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Ev hazırlığı (ticari olmayan)
  • 2.2 Ticari ortam kullanarak hazırlık
  • 2.3 Fermantasyon testlerine hazırlık
  • 2.4 Peptonada suyunun diğer çeşitleri
• 3 kullanım
  • 3.1 Dışkı örnekleri
  • 3.2 Yemek örnekleri
• 4 kalite kontrol
• 5 Sınırlamalar
• 6 Kaynakça

vakıf

Peptonlar bakteriyel gelişim için gerekli besinleri, özellikle azot ve kısa zincirli amino asitleri sağlarken, sodyum klorür ozmotik dengeyi korur.

Ek olarak, ortam endüstriyel işlemlerden zarar görmüş bakteriyel hücrelerin dağılmasını, homojenleşmesini ve onarılmasını sağlar..

Bir seyreltici olarak, fizyolojik çözeltinin (SSF) veya fosfat tamponunun (PBS) etkili bir şekilde değiştirilmesi idealdir..

Bakteriyel büyüme, bulanıklığını gözlemleyerek ortaya çıkar.

hazırlık

Ev yapımı hazırlık (ticari olmayan)

1 g pepton ve 8,5 g sodyum klorür tartılır, 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. PH 7.0'a ayarlanmalıdır. Bunun için 1 N sodyum klorür kullanabilirsiniz.

Ticari ortam kullanarak hazırlık

Susuz ortamın 15 gr'ı tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışımı homojenize edin. Gerekirse, toplam çözünmeye yardımcı olmak için karışım 1 dakika kaynatılır. Gerekirse 100 ml'lik şişelerde veya 10 ml'lik tüplerde servis yapın. 121 ° C'de 15 dakika otoklav.

Soğutun ve buzdolabında saklayın veya kullanın. Ortamın son pH'ı 7.2 ± 0.2'dir..

Susuz ortamın rengi açık bej ve hazırlanan açık sarıdır.

Fermantasyon testleri için hazırlık

Önceki preparasyona - sterilize etmeden önce - karbonhidrat,% 1'lik bir nihai konsantrasyona, ayrıca Andrade göstergesine (asit fuchsin) veya fenol kırmızısına (0.018 g / L) ilave edilmelidir. Tüplerin üzerine gaz oluşumunu gözlemlemek için bir Durham zili yerleştirilmelidir..

Diğer peptonada su çeşitleri

-Tampon veya tamponlanmış pepton suyu

Kazein enzimatik hidrolizat, sodyum klorür, potasyum dihidrojen fosfat ve sodyum hidrojen fosfat dodekahidrat içerir. Son pH 7.0 ± 0.2'dir.

Hazırlanması için 20 g susuz ortam tartılır ve 1 litre damıtılmış su içinde çözülür. Yaklaşık 5 dakika bekletin. Tamamen eriyene kadar 1 dakika ısıtın.

Gerektiğinde uygun şişelere dökün. Otoklavı 121 ° C'de 15 dakika boyunca sterilize edin.

-Alkali peptonlu su

25 g susuz ortamın tartılır ve 1 litre su içinde çözülür. Yukarıda açıklandığı gibi devam edin. PH 8,3 ile 8,7 arasındadır..

kullanım

İnokulum, numuneyi doğrudan yerleştirerek yapılır..

Numuneleri seyreltmek için kullanılır, özellikle hasarlı bakteri olabileceğinden şüphelenildiğinde. Genellikle dilüsyonlar 1:10 ve 1: 100'dür..

35-37 ° C'de aerobiyozda 24 saat inkübe edin.

Dışkı örnekleri

Salmonella'yı arayan dışkı örnekleri için, ön zenginleştirme ortamı olarak tamponlanmış veya tamponlanmış su kullanılması tavsiye edilir..

Bunu yapmak için şu şekilde devam edin:

Dışkı oluşursa, 1 g örnek alın. Eğer sıvılarsa, 1 ml dışkı alın ve 10 ml tamponlanmış suyla dolu bir tüpte süspansiyon haline getirin. Rektal swablar durumunda, swab içerisindeki materyali tamponlu peptonlu suyla tüpe boşaltın.

Her durumda, örneği çok iyi karıştırın ve homojenize edin.

18 ila 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin. Daha sonra, selenit sistin suyu veya tetrationat suyu gibi zenginleştirici bir et suyu içinde 18-24 saat boyunca 37 ° C'de yetiştirin. Sonunda diğerleri arasında SS agar, XLD agar, Hektoen agar gibi Salmonella için seçici ortamlarda yetiştirin..

Gıda örnekleri

Pepton suyu bir zenginleştirme ortamı olarak veya basit bir seyreltici olarak kullanılır, ancak Salmonella türleri aranırsa, daha önce tarif edildiği gibi bir zenginleştirme öncesi ortam olarak kullanılır..

Gıdalarda şu şekilde devam edin:

Katı yiyecekler için 25 gr numunenin ağırlığı ve sıvı yiyecekler için 25 ml ölçün. Bahsedilen kısmı 225 ml peptonlu su içeren şişelere yerleştirin. Numuneyi karıştırın ve homojenize edin.

Mikrobiyal yükün yüksek olduğundan şüpheleniliyorsa, koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayılmasını kolaylaştırmak için seri seyreltmeler veya ondalık sayılar yapılabilir..

Dilüsyonların sayısı, numunenin türüne ve analitik deneyime bağlı olacaktır..

Aksine, mikrobiyal yükün çok düşük olduğundan şüpheleniliyorsa, dilüsyon yapmak gerekli değildir. Daha sonra, seçici medyada yetiştirme.

Deniz ürünleri, deniz ürünleri gibi balıklar durumunda, balık, diğerlerinin yanı sıra, Vibrio cholerae veya diğer Vibrio türleri, pH 8.5'e ayarlanmış pepton suyu (alkali peptonlu su) kullanılmalıdır..

Kalite kontrol

Hazırlanan her partiden, bir ila iki tüp 37 ° C'de aerobiyozda 24 saat inokülasyon olmadan inkübe edilmelidir Sürenin sonunda, bulanıklık veya renk değişikliği gözlenmemelidir.

Ayrıca, etkinliğini değerlendirmek için iyi bilinen kontrol suşları kullanılabilir:

Bunun için, aşağıdaki bakteri suşları kullanılabilir: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Tüm durumlarda, ortamın bulanıklığı ile gözlenen tatmin edici bir mikrobiyal gelişme beklenir..

sınırlamaları

-Susuz ortam çok higroskopiktir, bu nedenle nemden uzak tutulmalıdır..

-Bir tür bozulma gözlemlenirse, ortam kullanılmamalıdır.

-Susuz kültür besiyeri 10 - 35 ° C arasında saklanmalıdır.

-Hazırlanan ortam buzdolabında saklanmalıdır (2-8 ° C).

referanslar

1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B ve Velázquez O. Gıdaların Mikrobiyolojik Analizi için Teknikler. 2009, 2. baskı. UNAM Kimya Fakültesi. Meksika. UNAM Kimya Fakültesi El Kitapları ve Belge Yöneticisi (AMyD) için Sürüm 1. http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratuvarlar Britania. Tamponlu peptonada suyu. 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
3. Neogen Laboratuvarları Pepton suyu Erişim: foodsafety.neogen.com
4. Laboratuvarlar Britania. Pepton suyu 2015. Erişim tarihi: britanialab.com
5. Merck Laboratuvarları Tamponlu peptonlu su Erişim: merckmillipore.com
6. Laboratuvarlar Conda Pronadisa. Alkali biberli su. Erişim: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott'un mikrobiyolojik tanısı. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.