Yarım SIM temel, hazırlık ve kullanım

yarım SIM Özellikle Enterobacteriaceae familyası olmak üzere bazı bakterilerin tanımlanmasına yardımcı olmak için özel olarak tasarlanmış yarı katı ve diferansiyel bir agardır. Triptein, pepton, demir sülfat, amonyum sülfat, sodyum tiyosülfat ve ağardan oluşur..

Bu besi üç önemli testin yapılmasına izin verir: Hidrojen sülfit üretimi (H₂S), indol oluşumu ve hareketliliği, dolayısıyla SIM kısaltması. Kullanışlılığı nedeniyle bakteriyoloji laboratuarında bulunamamaktadır..

Diğer ortamlardan farklı olarak, bu yarı katı olmalıdır, böylece bazı bakterilerin hareket kapasitesi algılanabilir. Bu anlamda, bu test Enterobacteriaceae için çok iyi çalışır, ancak Gram-negatif, fermente olmayan basillerde değil, örneğin beklemede olan damla gibi diğer metotların kullanılması tercih edilir..

SIM ortamı, bazı bakterileri diğerleriyle ilişkili olarak karakterize eden belirli spesifik özellikleri ayırt etmeyi sağlar. Örneğin Escherichia coli H ile ayırt edilir₂S (-), İndol (+) ve hareket kabiliyeti (+), Proteus mirabilis H₂S (+), indol (-), hareketlilik (+).

indeks

• 1 Vakfı
  • 1.1 Güç kaynağı
  • 1.2 Hidrojen sülfit üretimi
  • 1.3 İndol oluşumu
  • 1.4 Hareketlilik
• 2 Hazırlık
  • 2.1 Yarım SIM
  • 2.2 Kovac reaktifi
  • 2.3 Erlich reaktifi
• 3 Kullanım
  • 3.1 Tohumlu
• 4 kalite kontrol
• 5 Sınırlamalar
• 6 Kaynakça

vakıf

Diferansiyel olarak kabul edilen bir kültür ortamıdır, çünkü kullanımı hidrojen sülfit üretebilen mikroorganizmaları ayırt etmeyenlerden ayırmayı başarır; ayrıca, onu oluşturmayanların triptofandan indol oluşturanları vurgulamaktadır ve sonunda motili hareketsiz bakterilerden ayırmaktadır..

Güç kaynağı

Herhangi bir kültür ortamı olarak, zorlu olmayan mikroorganizmaların gelişebilmesi için gerekli besinleri sağlayan elementlere sahiptir. Bu elementler peptonlar ve tripteialarla temsil edilir..

Ortamda mikroorganizmanın gelişmesi, bu ortam tarafından değerlendirilen özelliklerin varlığını veya yokluğunu gözlemleyebilmek için esastır..

Hidrojen sülfit üretimi

SIM kısaltmasının S harfi, hidrojen sülfit (H) üretimini belirtir.₂G). Hidrojen sülfit oluşturabilen bakteriler sodyum tiyosülfatın sülfürünü alır.

H oluştuğunda₂S - renksiz gazlar - bu, ortamda bulunan demir tuzu ile reaksiyona girerek, açıkça görünür (siyah çökelti), demir sülfür oluşturur. H oluşturmayan bakteriler₂S, orijinal rengin ortasını bırakın (bej).

Siyah çökeltinin varlığı, hareketliliğin yorumlanmasını engelleyebilir. Bununla birlikte, H üreten enterobakterilerin çoğunun olduğu bilinmektedir.₂S, Salmonella, Proteus ve Citrobacter gibi pozitif hareketliliktir. Ek olarak, neredeyse tüm ortamı kaplayan siyah çökelti, pozitif hareket kabiliyetine işaret eder.

İndol eğitim

SIM kısaltmasının ikinci harfi indol oluşumunu temsil eden "I" dir..

Bu anlamda, tripteia, bir besin kaynağı olmasının yanı sıra, başka bir temel işlevi de yerine getirir. Bu pepton, triptofan adı verilen bir amino asit bakımından zengindir, bu nedenle, triptofanaz üreten bakterileri gösterebilir..

Bu enzim, indol (renksiz madde), piruvik asit ve amonyum oluşumu ile birlikte amino asit triptofanın kırpılmasından sorumludur..

Bu nedenle, bu reaksiyonun gösterilmesi için, açığa çıkan bir maddenin (Ehrlich reaktifi veya Kovac reaktifi) eklenmesi gerekir. Her ikisi de indol ile reaksiyona girerek, agarın yüzeyinde halka şeklinde kırmızı fuşya maddesi oluşturur. Fuşya halkası belirirse indol testi pozitif olarak yorumlanır..

Bu enzime sahip olmayan bakteriler halkayı oluşturmayacak ve negatif bir indol testi olarak yorumlanacaktır..

İndol testinin en son yorumlanması gerektiğine dikkat etmek önemlidir, çünkü reaktif eklendiğinde ortam bulanıklaşır ve hareketliliği görselleştirmeyi zorlaştırır..

motilite

Sonunda SIM kelimesinin "M" harfi hareketlilik anlamına gelir. Hareketliliği değerlendirebilmek için, bu ortam stratejik olarak yarı katıdır, çünkü bu özellik bakteri hareketinin olup olmadığını gözlemlemek için gereklidir. Flagella'ya sahip olan bakteriler bu pozitif testi verenlerdir..

Hem ilk inokulumda hem de çevresinde bulanıklık gözlendiğinde pozitif bir test ortaya çıkacaktır. Bununla birlikte, mobil olmayan bakteriler sadece ilk aşılama yolunda gelişir.

hazırlık

Yarım SIM

Susuz ortamdan 30 g tartılır ve bir litre damıtılmış su içinde çözülür. Karışım 5 dakika bekletilir ve daha sonra tamamen çözülene kadar karıştırılarak kaynamaya ısıtılır..

Karışımı test tüplerinde pamuklu kapaklı ve otoklavı 121 ° C'de 15 dakika boyunca dağıtın. Tüp rafını otoklavdan çıkarın ve ortamın bir blok şeklinde olması için dik bir konumda katılaşmasına izin verin..

Depolama için, kullanılana kadar buzdolabında saklanır. Hazırlanan ortamın son pH'sı 7.3 ± 0.2 olmalıdır.

Ortamı aşılama anında oda sıcaklığında olmalıdır. Besiyerinin rengi bej.

Kovac'ın reaktifi

150 ml amil veya izoamil veya bütil alkolü ölçün. (Belirtilen üç taneden birini kullanın).

10 g p-dimetilaminobenzaldehid çözündürülür. Sonra yavaşça 50 ml konsantre hidroklorik asit ekleyin.

Kullanıma hazır reaktif renksiz veya açık sarıdır. Kehribar bir şişede tutulmalı ve buzdolabında saklanmalıdır. Koyu kahverengi bir renk alırsa kullanmayın; bu hasar gördüğünü gösterir. Enterobakterilerle çalışırken bu reaktif tercih edilir.

Erlich reaktifi

2 g p-dimetilaminobenzaldehit tartılır ve 190 ml mutlak etil alkol içinde çözülür ve yavaş yavaş 40 ml konsantre hidroklorik asit ile karıştırılır. Kovac'ın reaktifini aynı şekilde tutun. Ehrlich reaktifi, fermente olmayan ve anaerobik bakteriler için daha fazla kullanılır.

uygulamaları

SIM besiyeri bakteriyoloji laboratuarlarında çok kullanılır. Enterobacteriaceae'nin tanımlanmasında aynı tüpte üç temel özelliğin gözlenebilmesi avantajı vardır..

ekili

Bu ortamı ekmenin doğru yolu, çalışılacak olan saf koloninin bir kısmının dikey olarak ortamın ortasına yerleştirildiği ve sokulduğu iğneyi kullanmaktır. Tek bir baskı yapılmalıdır. Delinme borunun dibine ulaşmamalıdır, doğru olan şey derinliğin sadece üçte ikisini örtmektir..

Olumlu hareketliliğin yanlış yorumlanmasına yol açabileceğinden, inokulumun tekrarlanması tavsiye edilmez. Aşılanan ortam aerobiyozda 37 ° C'de 24 saat kuluçkada bırakılır.

H üretimi olup olmadığı gözlemlendiği zaman sonucuna varıldı.₂S ve hareketlilik okunur. Sonunda indol ortaya çıkar, Ehrlich veya Kovac'ın reaktifinin 3 ila 4 damlası eklenir, hafifçe karıştırılır ve yorumlanır..

Kalite kontrol

Sterilite kontrolü olarak, bir veya iki tüp, 24 saat boyunca 37 ° C'de bir fırında inokülasyon olmadan inkübe edilir. Bu süreden sonra renk büyümesi veya değişimi olmayacağı beklenir.

Kalite kontrol olarak, aşağıdaki gibi sertifikalı bilinen suşlar kullanılabilir: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Beklenen sonuçlar: Escherichia coli 'H₂S negatif, indol ve pozitif hareketlilik, Enterobacter aerogenes sadece olumlu hareketlilik, Salmonella typhimurium 'H₂S ve pozitif hareketlilik, negatif indol ile. Proteus vulgaris hepsi olumlu Klebsiella pneumoniae ve Shigella sonnei hepsi olumsuz.

sınırlamaları

-Bazı suşları Morganella morganii, diğer suşlar arasında melanin üretimi nedeniyle bu ortamda kahverengimsi bir pigment üretebilir, bunun demirli demir sülfitin çökeltisiyle karıştırılmaması gerekir. Tecrübesiz profesyonellerde bu durum H testinin yorumunda yanlış pozitifler üretebilir.₂S.

-Sıkı aerobik bakteriler sadece tüpün yüzeyinde çoğalır, bu da hareketliliği yorumlamayı zorlaştırır.

referanslar

1. BD Laboratuvarları BBL SIM Orta. 2008. Erişim: bd.com
2. Neogen Laboratuvarları SIM Orta. Uygun fiyat: yiyecek güvenliği
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Orta. 2009. Şurada mevcuttur: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratuvarı SIM Orta. Erişim: .brizuela-lab.com
5. Laboratuvarlar Britania. SIM Orta. 2015. Uygun fiyat: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiyolojik tanı 5th ed. Editorial Panamericana S.A. Arjantin.